{英文名稱}CRABP2

{中文名稱}CRABP2抗體/細胞維甲酸結(jié)合蛋白2抗體

{規(guī)格}：0.1ml  0.2ml  

{研究領(lǐng)域}腫瘤  細胞生物  神經(jīng)生物學  信號轉(zhuǎn)導  新陳代謝  

{抗體來源}Rabbit

{克隆類型}Polyclonal

{交叉反應}Human, Mouse, Rat, Pig, Horse,

{產(chǎn)品應用}WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 （石蠟切片需做抗原修復）

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

｛分 子 量｝50kDa

｛性    狀｝Lyophilized or Liquid

｛濃    度｝1mg/1ml

｛免 疫 原｝KLH conjugated synthetic peptide derived from human ALDH3A1

｛亞    型｝IgG

｛純化方法｝affinity purified by Protein A

｛儲 存 液｝Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

｛保存條件｝Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

PubMedPubMed

免疫熒光技術(shù)CRABP2抗體/細胞維甲酸結(jié)合蛋白2抗體的實驗步驟

1. 直接免疫熒光法測抗原

⑴基本原理

將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。

⑵試劑與儀器

磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4

熒光標記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進行稀釋

緩沖甘油：分析純無熒光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制

搪瓷桶三只（內(nèi)有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）

有蓋搪瓷盒一只（內(nèi)鋪一層浸濕的紗布墊）

熒光顯微鏡

玻片架

濾紙

37℃溫箱等。

⑶實驗步驟

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，10min后棄去，使標本保持一定濕度。

② 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其*覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間（參考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不時振蕩。

④ 取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度，一般可用“+”表示：

（-）無熒光；（±）極弱的可疑熒光；（+）熒光較弱，但清楚可見；（++）熒光明亮；（+++ --++++）熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++”以上，而各種對照顯示為（±）或（-），即可判定為陽性。

⑷注意事項

1）對熒光標記的抗體的稀釋，要保證抗體的蛋白有一定的濃度，一般稀釋度不應超過1：20，抗體濃度過低，會導致產(chǎn)生的熒光過弱，影響結(jié)果的觀察。

2）染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標本及抗原而變化，染色時間可以從10 min到數(shù)小時，一般30 min已足夠。染色溫度多采用室溫（25℃左右），高于37℃可加強染色效果，但對不耐熱的抗原（如流行性乙型腦炎病毒）可采用0-2℃的低溫，延長染色時間。低溫染色較37℃30 min效-果好的多。

3）為了保證熒光染色的正確性，*試驗時需設置下述對照，以排除某些非特異性熒光染色的干擾。

① 標本自發(fā)熒光對照：標本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。

② 特異性對照（抑制試驗）：標本加未標記的特異性抗體，再加熒光標記的特異性抗體。

③ 陽性對照：已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。

如果標本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光，陽性對照和待檢標本呈強熒光，則為特異性陽性染色。

4）一般標本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現(xiàn)象，經(jīng)熒光染色的標本-好在當天觀察，隨著時間的延長，熒光強度會逐漸下降。