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251次簡介:酯酶主要分為非特異性酯酶(non-specificesterase)、酯酶(lipase)、膽堿酯酶(choli-esterase)。每一種酯酶常能水解許多不同的底物,多種不同的酯酶又能水解相同的底物,因此這一系列酯酶被稱為非特異性酯酶。非特異性酯酶的適pH為5.0~8.0,定位于溶酶體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng),在肝臟、腎臟、胰和小腸具有較高的酶活性。單核-吞噬細胞系統(tǒng)的單核巨噬細胞、樹突細胞也含有豐富的非特異性酯酶。α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE法)又稱非特異性酯酶染色液,其原理是細胞中的非特異性酯酶將α-乙酸萘酚水解產(chǎn)生α-萘酚,α-萘酚再與重氮鹽偶聯(lián),生成不溶性有色沉淀,定位于細胞質(zhì)。本染色液對酯酶染色無特異性,故又稱作非特異性酯酶染色液,可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片的非特異性酯酶染色,亦可作氟化鈉抑制試驗。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料:
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切入α-NAE固定液固定。
2、水洗,晾干。
3、入配制好的α-NAE孵育液,放入濕盒中,避光孵育,水洗。
4、入甲基綠染色液復染,水洗,鏡檢。
染色結(jié)果:
細胞質(zhì) 灰黑色或棕黑色彌漫性或顆粒狀沉淀
細胞核 綠色
氟化鈉抑制實驗:
按NaFsolution:α-NAE孵育液=1:25的比例,在α-NAE孵育液中加入NaFsolution,其余按上述染色法進行。
注意事項:
1、血液或骨髓細胞涂片應新鮮,薄厚適宜,一般2天內(nèi)染色,否則會影響酶的活性。
2、α-NAE孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。
3、α-NAE孵育液配制后易出現(xiàn)渾濁,但不會影響染色效果。
4、每次染色時,應有陽性對照片。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:6個月有效期
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