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中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)

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產(chǎn)品名稱:中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)
規(guī)格:4×2ml & 4x10ml
用途:專門用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,又稱同時偶聯(lián)法。
注意事項:堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳中。油鏡下計數(shù)100個中性粒細(xì)胞,求出百分比和積分。非特異性反應(yīng)少,結(jié)果可靠。
儲存條件:4℃,避光,6個月

簡介:堿性磷酸酶(Alkaline+phosphatase,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi),其活性所需適pH+9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮,還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下,細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液專門用于血液或骨髓細(xì)胞涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。

 

自備材料:
1、載玻片
2、4%多聚甲醛
3、顯微鏡

操作步驟(僅供參考):
(一)、涂片
1、制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片,NAP固定液固定,充分水洗。
2、滴加配制好的NAP孵育液,孵育,水洗。
3、滴加核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。水洗、晾干、鏡檢。

(二)+貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、+加入NAP固定液固定或多聚甲醛固定,PBS清洗。
3、滴加配制好的NAP孵育液,放入濕盒中,避光孵育,PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染。PBS清洗、鏡檢。

注意事項:
1、血液或骨髓細(xì)胞涂片應(yīng)新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。
2、培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微,以免損傷或丟失細(xì)胞。

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