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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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豬端粒酶(TE)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書

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產(chǎn)品名稱:豬端粒酶(TE)elisa試劑盒
英文名稱:Procine TE ELISA Kit
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等
產(chǎn)品性狀:48T/96T,盒裝液體
保存條件:2-8℃低溫保存
保質(zhì)期:六個(gè)月


樣本:血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
實(shí)驗(yàn)儀器:酶標(biāo)儀、恒溫箱、移液器、燒杯、自動(dòng)洗板機(jī)、離心機(jī)。
檢測(cè)方法:酶聯(lián)免疫吸附法
儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
研究領(lǐng)域:炎癥研究、神經(jīng)生物學(xué)、新陳代謝、信號(hào)通路、免疫學(xué)、傳染病、其他研究。
實(shí)驗(yàn)前:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。
特別說明:本Elisa試劑盒僅供科研實(shí)驗(yàn),不得用于其他用途;使用前仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書。

樣品的處理(是否溶血)、孵育時(shí)間和溫度、加入終止液后的反應(yīng)條件、洗板條件、加樣手法、抗體的純度、抗體濃度搭配等等,總之和Western Blot不同,ELISA作為定量方法有時(shí)候確實(shí)是太過敏感,而且本身方法也算有些復(fù)雜,各中實(shí)驗(yàn)條件的略微改變都可能影響zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以操作過程中,必須得嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行,以免浪費(fèi)時(shí)間和經(jīng)費(fèi),造成不必要的損失。


實(shí)驗(yàn)注明
1.  試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時(shí),請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物:底物請(qǐng)避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。


計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

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