在我們?nèi)粘５臋z測工作和進行的某些實驗中，經(jīng)常會遇到需要預(yù)估細菌懸液的細菌濃度這樣的問題，又是后我們需要精確計數(shù)菌液濃度，會用到血球計數(shù)板來進行計數(shù)；但有時我們只需要一個比較粗略的估計值即可，這里我推薦大家使用麥氏比濁法。

麥氏比濁管是McFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標準濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的，有表可查，這樣不同比例生成的硫/酸鋇沉淀的濃度不同，且都有定值。麥氏比濁管的配比如下：

這是傳統(tǒng)的麥氏比濁管的配制方法，目前也有市售的商品化產(chǎn)品，不需要自己配制，并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥氏比濁管，與傳統(tǒng)的麥氏比濁管相比，保存時間更長也更穩(wěn)定。但麥氏比濁管具體應(yīng)該怎?使用呢？

操作方法：

1、輕搖標準試管。

2、無菌操作將被測定的肉湯培養(yǎng)物加到與標準管相同直徑（大?。┑臒o菌試管中。

3、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水（NaCl），直到濃度與所要求的標準管的濃度相同。

4、直接用眼睛看（需要經(jīng)驗，誤差較大）。

5、找張白紙，打上平行直線，然后觀察讀數(shù)（如圖示，利用光在不同濃度液體折射不同）。

注意事項：

1、如果測定的肉湯培養(yǎng)物不澄清，由培養(yǎng)物的值減去δ接種培養(yǎng)基的值來校正細菌濃度。4號管(肉湯培養(yǎng)物)-1號管(孵育過的δ接種的肉湯管)=3號管(校正讀數(shù))。

2、如果肉湯顏色很深，把δ接種試管放在標準管的后面讀數(shù)即可。

3、測定好的細菌，最好做一下梯度稀釋涂布計數(shù)。

4、此濃度是對應(yīng)的大腸桿菌的濃度，如果是其他細菌，會有一定的差別，但通常差別都在一個數(shù)量級之內(nèi)，適合于普通實驗。

5、此種方法測定的準確性不是很高，如果是對細菌數(shù)量要求較精確的，請用紫外分光光度計。

6、麥氏比濁液應(yīng)放室溫暗處保存，用前混勻，有效期為6個月。應(yīng)用時為了準確也可以使用比濁儀但一定要防止麥氏濁度標準管δ搖勻或已過期失效。

在微生物學(xué)檢驗中，麥氏比濁法常作為細菌鑒定、實驗配制菌液時大致判斷菌液濃度的一種方法，通常認為，如將配菌液濃度配成0.5麥氏比濁管時，相當(dāng)于1.0×108細菌數(shù)/mL，由于方法本身就是一種估計的方法，所以盡管不同細菌大小差異很大，但除了真菌孢子，細菌的差別不大，結(jié)果不會有影響。

遠慕生物另附孢子菌懸液制作方法：

菌種活化

將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中，培養(yǎng)7d～14d，使生成大量孢子。δ制備孢子懸液時，不得拔去棉塞。?打開1支只供制備1次懸液，?次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的ù菌孢子。

孢子懸液制備

在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水，用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮ù菌孢子，將孢子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi)，然后注入40mL洗脫液。

錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?！?5粒與孢子混合，具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團的孢子散開，然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中，用離心機分離沉淀孢子，去上清液。再加入40mL洗脫液，重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.8～1.2)×106spores/mL的ù菌孢子懸液。若需要精確計數(shù)，則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用，若不在當(dāng)天使用應(yīng)在 3℃～7℃保存，并盡量在4d內(nèi)使用。