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DNA瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)拖尾的原因有以下:
1、 可以考慮是不是樣品不純,目的產(chǎn)物與雜帶相差不大,所以要多跑一段時(shí)間才有尾巴。參考marker,marker應(yīng)該不會(huì)有。如果有的話(huà)說(shuō)明配膠有問(wèn)題。
2 、瓊脂糖檢測(cè)DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚藍(lán)便可,注意上樣濃度;
3、可能是原液濃度太大造成的;
4、可能DNA已降解。
5、在提取前對(duì)樣品進(jìn)行一定的脫腐處理呀。很簡(jiǎn)單。有一種TENP buffer,文獻(xiàn)中查的到的。
6、 DNA降解避免核酸酶污染。
7、 DNA上樣量過(guò)多,可以減少凝膠中DNA上樣量。
8、 所用電泳條件不合適,可以將電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò)20V/cm,溫度<30℃,巨大DNA鏈,溫度應(yīng) <15℃,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。
9、 DNA樣含鹽過(guò)高,可以在電泳前通過(guò)乙醇沉淀去除過(guò)多的鹽。
10、 有蛋白污染,可以采用電泳前酚抽提去除蛋白。
11、 DNA變性,電泳前勿加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
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