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WesternBlot有很多雜帶的原因分析

時間:2022/2/22閱讀:683
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  1)目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小
 
  2) 樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作
 
  3)雜蛋白多,建議處理目的蛋白
 
  4)抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體
 
  5)抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間
 
  6)二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物
 
  7)二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度
 
  8)底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間
 

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