要說做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)大家最擔(dān)心的是什么，那應(yīng)該就是——細(xì)胞污染了，而其中支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室重最常見、最“臭名昭著”的污染之一。
為什么這么說呢?
這是因?yàn)橹гw污染幾乎可影響所有細(xì)胞生長(zhǎng)參數(shù)、代謝及研究的任一數(shù)據(jù)，并且，支原體缺乏細(xì)胞壁，所以常規(guī)的抗生素并不能對(duì)它們起到抵抗作用，而且由于其直徑太小，濾菌器也無法過濾，所以，細(xì)胞一旦有支原體污染則十分難以被清除，會(huì)給我們的實(shí)驗(yàn)造成極大的損失。
研究表明，細(xì)胞培養(yǎng)中有15-35%的細(xì)胞存在支原體污染，有些地區(qū)甚至高達(dá)80%。因此支原體檢測(cè)成為了細(xì)胞質(zhì)控中*的環(huán)節(jié)，被列入《中國(guó)藥典》檢測(cè)的范疇。
細(xì)胞支原體污染的表現(xiàn)：
細(xì)胞狀態(tài)變差、生長(zhǎng)變慢，在顯微鏡下觀察可能會(huì)有小黑點(diǎn)，但培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁。細(xì)胞傳代以后就出現(xiàn)細(xì)胞間黑點(diǎn)，細(xì)胞空泡化，很多類似凋亡、壞死的細(xì)胞，最終細(xì)胞漂浮，*死亡。
支原體污染從何而來？
1. 已受污染的細(xì)胞;
2. 操作人員的疏失;
3. 已受污染的培養(yǎng)基、血清 ;
4. 操作環(huán)境不良、實(shí)驗(yàn)器具不潔等。
檢測(cè)有無支原體污染可做如下檢查：
①相差顯微境檢測(cè)：將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內(nèi)含有的DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察，鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜表面的亮綠色小點(diǎn)。
?、垭婄R檢查：用掃描電鏡方法簡(jiǎn)便快速，也可以利用透射電鏡。
④DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高，但方法較為復(fù)雜。
如果檢測(cè)到有支原體污染，該如何處理呢?
方法1：直接棄之!
這就非常簡(jiǎn)單粗暴了，如果還沒做處理，還是趕緊棄之吧，搶救不如重新復(fù)蘇了，另外對(duì)培養(yǎng)箱要做由里至外的清潔處理。
方法2：使用支原體清除培養(yǎng)基
如果你培養(yǎng)的細(xì)胞比較珍貴，直接丟棄可惜，那么在確定對(duì)細(xì)胞的基因及蛋白表達(dá)沒有影響的情況下，可以使用——支原體清除培養(yǎng)基。
遠(yuǎn)慕生物支原體清除培養(yǎng)基的優(yōu)勢(shì)：
1，活性范圍廣：各支原體株系均可作用。
2，安全可靠：工作濃度低，無細(xì)胞毒性。
3，使用方便：將支原體去除試劑加入污染培養(yǎng)物即可，操作簡(jiǎn)單。
4，時(shí)效快：使用的第二天可以明顯看出細(xì)胞內(nèi)的小黑點(diǎn)變少，細(xì)胞狀態(tài)變好。
