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中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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霉菌平板計(jì)數(shù)法的樣品稀釋流程

時(shí)間：2021/7/16閱讀：1078
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　　霉菌平板計(jì)數(shù)法的樣品稀釋分為固體，半固體，液體樣品三種狀態(tài)，稀釋流程如下：
 
　　1.固體和半固體樣品：稱取25g樣品，加入225ml無(wú)菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液)，充分振搖，或用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min，制成1∶10的樣品勻液。
 
　　2.液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL無(wú)菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液)的適宜容器內(nèi)(可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)或無(wú)菌均質(zhì)袋中，充分振搖或用拍擊式均質(zhì)器拍打lmin~2min，制成1∶10的樣品勻液。
 
　　3.取1mL，1∶10樣品勻液注入含有9mL無(wú)菌稀釋液的試管中，另?yè)Q一支1mI無(wú)菌吸管反復(fù)吹吸，或在旋渦混合器上混勻，此液為1∶100的樣品勻液。
 
　　4.按3操作，制備10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1支lmL無(wú)菌吸管。
 
　　5.根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)~3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1mL樣品勻液于2個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取lmL無(wú)菌稀釋液加入2個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。
 
　　6.及時(shí)將20mL~25mL冷卻至46℃的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。置水平臺(tái)面待培養(yǎng)基*凝固。
 
　　稀釋以后，開始培養(yǎng)瓊脂凝固后，正置平板，置28℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。

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