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微生物細(xì)胞大小,是微生物的形態(tài)特征之一,也是分類鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小,只能在顯微鏡下測量。用來測量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。
實驗方法原理
鏡臺測微尺是中央部分刻有精-確等分線的載玻片。一般將1 mm 等分為100格(或2 mm等分為200格),每格長度等于0.01 mm(即106 μm)。是于校正目鏡測微尺每格長度的。目鏡測微尺是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片,其中央刻有精-確的刻度,有等分50小格或100小格兩種,每5小格間有一長線相隔。由于所用接目鏡放大倍數(shù)和接物鏡放大倍數(shù)的不同,目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也就不同,因此,目鏡測微尺不能直接用來測量微生物的大小,在使用前必須用鏡臺測微尺進(jìn)行校正,以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值,然后才可用來測量微生物的大小。
實驗材料
枯草芽孢桿菌染色玻片標(biāo)本
試劑、試劑盒
香柏油
儀器、耗材
目鏡測微尺 鏡臺測微尺 顯微鏡 擦鏡紙
實驗步驟
1. 目鏡測微尺的標(biāo)定
(1)放置目鏡測微尺取出接目鏡,旋開接目鏡透鏡,將目鏡測微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內(nèi)的隔板上,然后旋上接目透鏡,后將此接目鏡插入鏡筒內(nèi)。
(2)放置鏡臺測微尺將鏡臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上,使刻度面朝上。
(3)校正目鏡測微尺先用低倍鏡觀察,對準(zhǔn)焦距,當(dāng)看清鏡臺測微尺后,轉(zhuǎn)動接目鏡,使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行,移動推動器,使目鏡測微尺和鏡臺測微尺的某一區(qū)間的兩對刻度線*重合,然后計數(shù)出兩對重合線之間各自所占的格數(shù)。
根據(jù)計數(shù)得到的目鏡測微尺和鏡臺測微尺重合線之間各自所占的格數(shù),通過如下公式換算出目鏡測微尺每小格所代表的實際長度。
同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。
2. 菌體大小的測定
目鏡測微尺校正后,移去鏡臺測微尺,換上枯草芽孢桿菌染色玻片標(biāo)本,校正焦距使菌體清晰,轉(zhuǎn)動目鏡測微尺(或轉(zhuǎn)動染色標(biāo)本),測出枯草芽孢桿菌的長和寬各占幾小格,將測得的格數(shù)乘以目鏡測微尺每小格所代表的長度,即可換算出此單個菌體的大小值,在同一涂片上需測定10至20個菌體,求出其平均值,才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)生長期的菌體來進(jìn)行測定。
3. 取出目鏡測微尺,將接目鏡放回鏡筒,再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦拭后,放回盒內(nèi)保存。
4. 結(jié)果
(1)將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表。
(2)在高倍鏡下測量枯草芽孢桿菌大小結(jié)果填入下表。
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