問：我養(yǎng)的是RAW264.7細(xì)胞，不知道為什么長得這么快？而且消化也很容易，好像和園子里其他養(yǎng)RAW細(xì)胞的很不一樣。一般傳代（1傳2）后大概16－20個(gè)小時(shí)左右就能夠長到90％，請問是應(yīng)該一定等到24小時(shí)再傳代，還是可以等長到90％（<24小時(shí)）如果沒到24小時(shí)就傳代的話，會(huì)對細(xì)胞狀態(tài)有影響么？

答：很多試驗(yàn)中要求分盤后24h時(shí)再開始實(shí)驗(yàn)（如轉(zhuǎn)染），除了讓細(xì)胞充分貼壁，還有一個(gè)重要原因就是使細(xì)胞達(dá)到正常代謝水平。從你的描述來看，如果細(xì)胞貼壁還比較快的話，個(gè)人認(rèn)為可以進(jìn)行傳代，若細(xì)胞密度過高達(dá)接觸抑制，細(xì)胞比較容易老化。

還有建議-好傳代時(shí)采用更低一些的稀釋度（1:3或者更低）。 感覺1:2太高了，建議到ATCC上查找一下，會(huì)找到-佳的subc*tion ratio。以便保證細(xì)胞的-佳狀態(tài)，不要舍不得扔細(xì)胞，subculture的時(shí)候把細(xì)胞全用上，你的細(xì)胞長得快，頻繁的subculture，細(xì)胞不但不能優(yōu)化還可能會(huì)發(fā)生變異。

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問：請問1:2太高了是什么意思??？是不是要1:3以上傳代呢？因?yàn)槿绻麄鞯锰×?，?xì)胞長起來比較慢，可能有群集效應(yīng)。所以一般每天傳代，到底傳代頻繁是能夠改善細(xì)胞狀態(tài)還是像你所說得會(huì)造成變異呢？

答：剛幫你查下：RAW 264.7，Subc*tion ratio: A subc*tion ratio of 1:3 to 1:6 is recommended。Medium renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days。所以說你1：2傳太高了，是這個(gè)意思。建議加大傳代比率，1：3或1：4傳。反復(fù)傳代勞命傷財(cái)，對細(xì)胞也有害，特別是細(xì)胞未到24h。細(xì)胞傳代的比率要適當(dāng)。細(xì)胞太少，生長慢，因細(xì)胞生長需相互間有信號傳導(dǎo)。

細(xì)胞太多，也不好，因細(xì)胞太多會(huì)有“接觸抑制”。我也從ATCC上看過這個(gè)，不過由于我們養(yǎng)的細(xì)胞不可能和他們的條件*一樣，所以對于傳代就不可能*按照它們說的。不過看來還是有一定的道理哦?，F(xiàn)在覺得，其實(shí)1：3傳代可能更適合現(xiàn)在的細(xì)胞生長速度，長得太快太慢了，細(xì)胞都擠的變圓了。細(xì)胞太少的時(shí)候會(huì)抑制它們的生長速度。

問：請教一下，為什么細(xì)胞太少的時(shí)候會(huì)抑制它們的生長速度呢？

答：細(xì)胞生長需要一定的輔因子，而這些不僅要求血清供給，還有細(xì)胞在培養(yǎng)過程中生成的，若細(xì)胞太少，會(huì)導(dǎo)致這類因子不足。有時(shí)候會(huì)在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)候，放一些伴生長細(xì)胞是這個(gè)原因，好像叫保姆細(xì)胞。我養(yǎng)的是骨肉瘤細(xì)胞，生長速度也很快。

我一般等長滿了就傳代，不是特別關(guān)注時(shí)間。你在傳代分瓶的時(shí)候多分幾瓶。但也不能太多，因?yàn)榧?xì)胞太少的時(shí)候會(huì)抑制它們的生長速度?？词鞘裁醇?xì)胞了，如是生長比較旺盛的細(xì)胞，只要貼壁情況良好就可以傳。我培養(yǎng)的是hela細(xì)胞。復(fù)蘇后不到24小時(shí)的換液以后，過了-6小時(shí)就可以傳代了。但是好像對其他多數(shù)細(xì)胞建議還是24小時(shí)后傳。