1. 沒(méi)有從結(jié)果反推設(shè)計(jì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程

在開(kāi)始就要考慮你將需要在申請(qǐng)或論文中展示的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。所以在你訂購(gòu)支試劑或者準(zhǔn)備細(xì)胞前，更為重要的是從結(jié)尾開(kāi)始去考慮整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程。這意味著要去理解生物學(xué)的假說(shuō)，以及選擇哪種統(tǒng)計(jì)方法測(cè)試該假說(shuō)是否合理。

正如統(tǒng)計(jì)學(xué)家 Frank Anscombe 說(shuō)過(guò)：「重要的是我們能意識(shí)到真正的問(wèn)題所在 ，并且盡我們所能去解決它。而不是另外找一個(gè)可以完*但毫不相干的替代問(wèn)題。」

理解這些假說(shuō)以及了解如何測(cè)試它們的合理性，可以帶領(lǐng)研究人員們走上從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù)分析再到統(tǒng)計(jì)測(cè)試的康莊大道。作為獎(jiǎng)勵(lì)，通過(guò)為統(tǒng)計(jì)測(cè)試做準(zhǔn)備，您可以預(yù)測(cè)出實(shí)驗(yàn)的規(guī)模，從而收集到充足的樣本使您實(shí)驗(yàn)的終結(jié)果更為可信。

2. 未能設(shè)計(jì)合適的抗體配色方案

在理解生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)后，可以開(kāi)始進(jìn)行配色方案設(shè)計(jì)。

這需要多步驟實(shí)現(xiàn)，首先確認(rèn)檢測(cè)哪些分群，并且確認(rèn)終的結(jié)果是檢測(cè)分群的百分比變化，還是檢測(cè)一種或多種標(biāo)志物的表達(dá)。

在此基礎(chǔ)上，了解儀器和配色方案的熒光染料對(duì)進(jìn)一步設(shè)計(jì)以減少補(bǔ)償問(wèn)題和重要通道分辨率的損失。當(dāng)設(shè)計(jì)配色方案時(shí)不要遺漏通道或可能用到的染料。同時(shí)注意不要在設(shè)計(jì)配色方案時(shí)顧此失彼。

3. 未能優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

優(yōu)化步驟須包括：

A）試劑滴定

在任何流式實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑都應(yīng)該進(jìn)行滴定和優(yōu)化。 這樣做的目的是獲得信噪比和減少背景干擾。

B）PMT 電壓。

光電倍增管（PMT）靈敏度是基于微珠檢測(cè)設(shè)置的，這將確保進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的電壓區(qū)間 PMT 的敏感度。

該電壓可根據(jù)特定的細(xì)胞/熒光組合進(jìn)一步進(jìn)行調(diào)整，從而進(jìn)一步優(yōu)化檢測(cè)靈敏度。

4. 未使用正確的對(duì)照

為了成功進(jìn)行流式實(shí)驗(yàn)分析，需要在確立穩(wěn)健的多色配色方案，確定正確對(duì)照和進(jìn)行重復(fù)性好的分析上花費(fèi)大量的時(shí)間和精力。研究者不想看到他們的發(fā)現(xiàn)不是由于真正的生物學(xué)變化無(wú)法被證實(shí)，而是由于儀器的問(wèn)題無(wú)法被證實(shí)。

除了資源共享實(shí)驗(yàn)室和核心設(shè)備花費(fèi)大量的時(shí)間在儀器質(zhì)量控制上，研究人員也會(huì)把質(zhì)量控制結(jié)合進(jìn)他們的實(shí)驗(yàn)中。質(zhì)量控制管能實(shí)現(xiàn)確保實(shí)驗(yàn)之間的 PMT 電壓一致，能確保實(shí)驗(yàn)正確進(jìn)行并且能確保設(shè)門(mén)策略具有說(shuō)服力。

5. 未能提供顯示或設(shè)門(mén)策略的細(xì)節(jié)

對(duì)于終結(jié)果的展示，重要的是可信度和可重復(fù)性。在展示設(shè)門(mén)策略時(shí)（即使是在補(bǔ)充材料中），需說(shuō)明每個(gè)區(qū)域是如何設(shè)置的。諸如使用何種對(duì)照和是否使用區(qū)域百分比等問(wèn)題需要進(jìn)行討論。

如果使用電子數(shù)據(jù)，請(qǐng)確保展示了數(shù)據(jù)的任何轉(zhuǎn)換形式，以及這些數(shù)據(jù)是如何持續(xù)應(yīng)用的。避免使用單變量圖（直方圖），確保展示了圖上的數(shù)據(jù)總數(shù)，以便理解實(shí)驗(yàn)的量級(jí)。

后，不要僅依靠圖片。流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)可以是非常量化的數(shù)據(jù)，也可以盡可能地使用表格展示數(shù)據(jù)。