大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒屬大鼠ELISA試劑盒類，又稱大鼠白介素10(IL-10)ELISA Kit，主要用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。更多關(guān)于本品的詳情咨訊由上海遠(yuǎn)慕生物提供講述。

大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒檢測(cè)說明書

　　【信息說明】

　　中文名：大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒

　　別名：大鼠白介素10(IL-10)ELISA Kit

　　供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

　　規(guī)格：48t/96t

　　保存：2~8℃

　　有效期：6個(gè)月

　　樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

　　特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。

　　用途：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。

　　種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。

　　檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

　　【配制組成】

　　1、酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊(96孔)

　　2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)：2瓶(凍干品)

　　3、樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶

　　4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶

　　5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶

　　6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)

　　7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)

　　8、底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶

　　9、濃洗滌液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍

　　10、終止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)

　　【樣本處理】

　　1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過一夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　2、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　3、組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

　　4、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　【操作步驟】

　　1、編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)。

　　2、加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

　　4、配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　7、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。

　　8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　9、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　【注意事項(xiàng)】

　　1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物請(qǐng)避光保存。

　　7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　10、如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

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