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PEG1450溶液(50%,無菌) 操作方法

【信息說明】

產品名稱：PEG1450溶液(50%,無菌)

供應商：遠慕生化試劑廠家

規(guī)格：10ml 5×10ml

分類：細胞培養(yǎng)

儲存條件：4℃,6個月

用途：聚乙二醇可用作融合劑，以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導細胞雜交，同SigmaP7181。

注意事項：無菌溶液，由DPBS(pH7.4)和PEG1450或稱聚乙烯醇1450組成,經過濾除菌。

【操作方法】

1、 如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。

2、單層貼壁細胞:將雜交前體細胞以相同數量(5×104/ml)接種，以適當的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,待細胞貼壁擴展至匯合成片(80%匯合率)的密度；吸干培養(yǎng)液，加入 PEG1450溶液(50%,無菌)，輕輕轉動1min使PEG1450溶液覆蓋所有細胞。

3、靜置1min：加入*MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液，再用5ml MEM培養(yǎng)液洗滌被PEG處理的細胞；吸干凈洗液，加入 MEM培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)過夜。24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細胞，待細胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT選擇培養(yǎng)剔除HPRT和TK缺陷細胞。

4、棄上清液：用補加1×HT和1×A的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞；融合后進行異核體分析，雜交前體細胞在4~5天內發(fā)生死亡，對于大多數融合前體細胞而言，可見雜交細胞克隆。

5、懸浮細胞：將兩種不同親體的細胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細胞混勻并重新懸?。辉陔x心管中加入1ml PEG1450溶液(50%,無菌)，置于37℃水浴，加入提前37℃預熱的含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，使PEG1450稀釋并停止作用。

6、離心：棄上清液,加入5ml*MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液；用5ml無血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細胞(不要破壞細胞)，1000g離心5min，棄上清液,重復1次該步驟。

7、加入含有胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)基，混勻；將細胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml，接種于96孔板，37℃ 5%CO2孵育過夜24~48h后選出融合細胞。

【注意事項】

1、 應注意無菌操作，避免被微生物污染。

2、 PEG1450溶液較為粘稠時，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、 體外培養(yǎng)的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞。

4、 如需HAT選擇系列產品，可選擇Leagene A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

【服務承諾】

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1.對用戶所有疑問，快速做出反映，售后服務人員在2~3個工作日內給您一個滿意的答復。

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