兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟詳細(xì)說明

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中文名：兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒

中文別名：兔子白介素3(IL-3)ELISA Kit

供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

規(guī)格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6個(gè)月

特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。

用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。

ELISA試劑盒種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等。

試劑盒檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

適用范圍：僅用于科研實(shí)驗(yàn)，禁用于臨床。

兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟

操作步驟：

1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 

2、酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 

5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 

6、洗板，同(4)。 

7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 

9、洗板，同(4)。 

10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 

11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 

12、分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13、數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

注意事項(xiàng)：

1、在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。

2、建議新鮮標(biāo)本收集后盡早檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集?biāo)本，請將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或- 70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。

3、當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

4、洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

5、一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)。

6、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。

7、如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

8、在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí)，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

9、底物請避光保存。

10、不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

性能優(yōu)點(diǎn)：

1、、靈敏、特異的抗體；

2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

4、適用血清，血漿，組織勻漿液，細(xì)胞培養(yǎng)上清液，尿液等等多種標(biāo)本類型。

實(shí)驗(yàn)原理：

采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

標(biāo)本的處理：

1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是稀釋5倍。

2、腦脊液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是5倍。

3、血漿

a、用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲存在零下80℃直到使用。

b、用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液126倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測，按照說明書方法檢測。

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