實(shí)驗(yàn)材料：
      1.  早產(chǎn)兒或死亡胎兒的皮膚，也可用手術(shù)取下的成體皮膚
      2.  1000000U/L中性蛋白酶，0.25%胰蛋白酶
      3.  MEM和HBSS混合液，添加20mmol/L HEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L鏈霉素和1.59g/L慶大霉素，HBSS
      4.  手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷
      5.  不銹鋼網(wǎng)
      6.  離心管（15ml、50ml）

      實(shí)驗(yàn)方法：

      1.  的制備
      （1）  取厚1.5mm的皮片，放入4℃用MEM和HBSS混合液浸洗，切成6cm×2cm的皮條。
      （2）  在培養(yǎng)皿中加入HBSS，然后放皮條，使面朝下，皮片漂浮其中。在37℃條件下，孵育8-10d，每3d換液1次。
      （3）  用眼科鑷將與表皮分離，將切成0.5cm2 小片。將植塊表皮面朝上放入培養(yǎng)皿中。
      （4）  在-80℃和37℃下反復(fù)凍融植塊10次，以去除存活的細(xì)胞成分，從而形成以膠原纖維網(wǎng)架為主的組織，作為以后角質(zhì)形成細(xì)胞生長的支持物，然后將植塊在-80℃下冷凍保存。

      2.  復(fù)合培養(yǎng)
      （1）  在37℃水浴中融化凍存的植塊，放入培養(yǎng)皿內(nèi)，使乳頭面朝上。加入5ml培養(yǎng)液，在37℃條件下孵育過夜。
      （2）  將角質(zhì)形成細(xì)胞種植到植塊上，培養(yǎng)12h。
      （3）  角質(zhì)形成細(xì)胞貼附于植塊后，將復(fù)合培養(yǎng)的植塊轉(zhuǎn)移到無菌的不銹鋼網(wǎng)上，移至新的培養(yǎng)皿內(nèi)。
      （4）  加入培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的量不能超過不銹鋼網(wǎng)高度，讓表面的角質(zhì)形成細(xì)胞暴露于空氣當(dāng)中，促進(jìn)細(xì)胞分化。在加液過程中要防止氣泡形成，以免破壞液氣界面。

      3.  結(jié)果分析
      在上復(fù)合培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞分化能力良好，可分化形成明顯的棘細(xì)胞層、顆粒細(xì)胞層和角質(zhì)細(xì)胞層等表皮結(jié)構(gòu)。