我覺(jué)得影響心肌細(xì)胞貼壁的因素可以總結(jié)為如下幾點(diǎn)：

1、所用老鼠的品系以及年齡

SD大鼠和Wister大鼠還是有很大差別的，包括小鼠在內(nèi)也是，大部分用SD大鼠差速貼壁時(shí)間為2小時(shí)，個(gè)人認(rèn)為1.5小時(shí)也行，只是一個(gè)范圍而已。有時(shí)由于買的是活力不好的的老鼠導(dǎo)致貼壁能力較差。

2、培養(yǎng)基的PH值

由于心肌細(xì)胞非常嬌嫩，PH如果很堿的話就比較難貼壁。所以我們每次都是在取材之前才調(diào)培養(yǎng)基的PH值，這樣避免ph值出現(xiàn)較大范圍的波動(dòng)（培養(yǎng)基配置一段時(shí)間后，如果hepes加的量不夠，PH可能會(huì)變化較大）。

3、細(xì)胞接種密度

很多人為了省事，不喜歡計(jì)數(shù)，結(jié)果接種密度太大影響貼壁，密度太小，細(xì)胞之間不能形成有效得到（即分泌一些生長(zhǎng)因子促進(jìn)生長(zhǎng)）

4、血清的問(wèn)題

我們開(kāi)始用四季青的，養(yǎng)的很好的后來(lái)?yè)Q了批次就養(yǎng)的不好了。不是我崇洋媚外，國(guó)產(chǎn)的血清就是性能不穩(wěn)定，即批次之間的穩(wěn)定性比較差，現(xiàn)在我們用hyclone的效果一直不錯(cuò)，

5、培養(yǎng)瓶的問(wèn)題

如果細(xì)胞的狀態(tài)不佳，不妨預(yù)先用多聚賴氨酸或者明膠處理一番，經(jīng)費(fèi)允許的話，用血清預(yù)處理過(guò)夜也行，感覺(jué)即使是用玻璃的培養(yǎng)瓶經(jīng)過(guò)處理以后貼壁得能力也不錯(cuò)，不過(guò)建議還是用coring的，griner（德國(guó)產(chǎn)）也行。

6、胰蛋白酶的問(wèn)題

濃度與作用時(shí)間都是比較大的影響因素，值能耗靠自己摸索了，我們用0.25%取出來(lái)的心肌細(xì)胞總是長(zhǎng)的不咋的，也許是水平有限吧。

這是zui近一段時(shí)間養(yǎng)心肌細(xì)胞的小小經(jīng)驗(yàn)，希望以后可以能和大家好好交流

我也是近期在培養(yǎng)心肌細(xì)胞，總體感覺(jué)貼壁的時(shí)間，我們現(xiàn)在就用1小時(shí)15分鐘就足夠了，貼壁完了，把上清吸出以后再用*培養(yǎng)基洗一遍，可以把一些附著在成纖維細(xì)胞表明的心肌細(xì)胞洗下來(lái)，以保證細(xì)胞數(shù)。

我們覺(jué)得胰酶的消化力還是太強(qiáng)了，單用胰酶的話，建議把濃度調(diào)低一點(diǎn)，我們以前一直用0.08%的胰酶分次消化。現(xiàn)在改用胰酶加膠原酶，即0.125%胰酶+0.08%膠原酶等比混合后消化10分鐘，一般10只老鼠我們用混合酶10ml*次消化，后面根據(jù)剩余的組織量調(diào)整消化酶的體積，一般要求吹打后能將組織充分在消化酶中分散開(kāi)，即傳統(tǒng)所說(shuō)的組織量的30-50倍。這種方法我們經(jīng)常消化2-3次就*可以了。

大家說(shuō)的很好，關(guān)于PH值、血清的選擇、還有板都很重要，有條件的話盡量選擇國(guó)外的產(chǎn)品。還有心肌細(xì)胞培養(yǎng)不用包板也能貼壁得很好的，你們可以再試試。

還有一點(diǎn)就是各種培養(yǎng)板上所種的細(xì)胞密度一定要合適，現(xiàn)將我們所用的寫在下面僅供參考：T25培養(yǎng)瓶：5×106，zui多可裝7ml；6孔板：2.5×106，2ml；24孔板：2.5×105，1ml；96孔板：5×104，100ul。

你們差速時(shí)是放在進(jìn)口一次性的瓶子里嗎？我用的都是coring的，都是新的，現(xiàn)在我們實(shí)驗(yàn)室都還沒(méi)有專門去處理用過(guò)的這些瓶子，所以我們都是一次性使用，為了節(jié)約我開(kāi)始都是放在玻璃瓶中，差速后才轉(zhuǎn)移到一次性瓶子中的。請(qǐng)問(wèn)用玻璃瓶差速1小時(shí)15分夠嗎？差速完是不是看到成纖維細(xì)胞已經(jīng)貼壁而且有細(xì)胞形態(tài)了呢？

我培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞采用的是0.1%胰酶+0.05%膠原酶II，用D-hanks或PBS配制消化心肌組織。差速貼壁2h， 用一次性原代培養(yǎng)瓶即可。