CIK細胞實驗方法，即細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一種新型的免疫活性細胞，CIK增殖能力強，細胞毒作用強，具有一定的免疫特性。

由于該細胞同時表達CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又稱為NK細胞（自然殺傷細胞）樣T淋巴細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性，和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點。該細胞對腫瘤細胞的識別能力很強，如同“細胞”，能精確“點射”腫瘤細胞，但不會傷及“無辜”的正常細胞。尤其對手術后或放*后患者*，能消除殘留微小的轉移病灶，防止癌細胞擴散和復發(fā)，提高機體免疫力，因此，CIK細胞被認為是新一代的腫瘤過繼細胞*的*方案。

CIK細胞可以通過多機制抗腫瘤、抗病毒：

1.CIK細胞能以不同的機制識別腫瘤細胞，通過直接的細胞質顆粒穿透封閉的腫瘤細胞膜進行胞吐，釋放穿孔素、顆粒酶，實現(xiàn)對腫瘤細胞的裂解；

2.CIK細胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多種炎性細胞因子，對腫瘤也有直接抑制作用；

3.CIK細胞可以通過配體-受體（Fas:FasL）介導的方式誘導腫瘤細胞凋亡，因此CIK尤其適用于FasL陽性腫瘤的治療；

4.CIK細胞分泌的細胞因子能顯著刺激初始型T細胞增殖，有效激活機體的免疫系統(tǒng)，使之趨于正常，提高病人自身抗腫瘤的能力。

目前，腫瘤的發(fā)生機制尚未形成普遍接受的理論。研究者普遍認可腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關。即在正常情況下，腫瘤與機體的防御機能之間處于一種動態(tài)的平衡，而一旦這種平衡被破壞，就可能發(fā)生腫瘤。身體各組織細胞受到外界化學、物理、生物等因素刺激或自身細胞衰老變異等因素的影響，使得體內(nèi)某些細胞發(fā)生突變，成為癌前細胞；而機體免疫功能低下或者由于免疫異常，無法及時識別、殺傷、清除這些異常細胞，突變細胞在組織內(nèi)復制生長，達到一定數(shù)量后破壞器官功能，腫瘤即發(fā)生。腫瘤患者，尤其是惡性腫瘤病人往往免疫功能、特別是細胞免疫功能低下，因而疾病呈進展、活動、預后差。因此，提高機體免疫力，建立有效的免疫應答是治療腫瘤zui有希望的途徑。CIK細胞治療即將大量殺傷性高、功能強、數(shù)量多的免疫活性細胞回輸患者體內(nèi)，直接發(fā)揮殺死腫瘤細胞的作用，并通過調節(jié)、激活患者的免疫體系，調動、提高患者自身的抗腫瘤能力。

CIK細胞具有以下突出的特點：

1.增殖速度快，殺瘤活性高。CIK細胞可以在體外大量擴增，培養(yǎng)14天可以增殖200倍以上，其效應細胞CD3+CD56+的增殖可達1000倍以上，抗腫瘤活性得以大大增強。

2.殺瘤譜廣。CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷是非MHC限制的，對多種腫瘤細胞均有殺滅作用。

3.能抵抗腫瘤細胞引發(fā)的效應細胞Fas-FasL凋亡。CIK細胞雖然在Fas被占據(jù)后會引起少量細胞凋亡，但對其殺瘤細胞毒性沒有明顯影響；反之，CIK細胞可以誘導FasL陽性腫瘤細胞的凋亡。

4.對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感。CIK細胞對放、*敏感的親本細胞和不敏感的轉化細胞均具有強大的殺傷活性。

5.CIK細胞殺瘤活性不受CsA（*A）和FK506（普樂可復）等免疫抑制劑的影響。

6.對正常骨髓造血前體細胞毒性小，僅對紅系生成產(chǎn)生輕微的抑制，這可能與CIK細胞自身分泌高水平的IFN-γ有關。

7.CIK細胞具有識別腫瘤的機制，特異性強，對正常的細胞無毒性作用。

8.安全性好。CIK細胞是活化的患者自體細胞，應用安全，不會產(chǎn)生排斥等反應，患者副反應小。

優(yōu)勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內(nèi)膜細胞等
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6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

間隙連結蛋白31.9抗體 GJC1
甘油激酶2抗體 GK2
β-半乳糖苷酶1/β-Gal/彈性蛋白受體1抗體 GLB1
*脫羧酶P蛋白抗體 GLDC
核孔蛋白GLE1抗體 GLE1
腎小球上皮蛋白1抗體 GLEPP1
轉錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體 GLI4
麥角蛋白抗體 Gliadin
膠質瘤發(fā)病相關蛋白1抗體 GLIPR1L1
糖基轉移酶25結構域1/前膠原半乳糖基轉移酶1抗體 GLT25D1
*酰胺水解酶抗體 GLS2
糖基轉移酶25結構域2/前膠原半乳糖基轉移酶2抗體 GLT25D2
糖基轉移酶28家族1抗體 GLT28D1
糖基轉移酶6結構1抗體 GLT6D1
膠質瘤抑癌候選基因2抗體 GLTSCR2
磷酸化糖皮質激素受體抗體 Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser226)
葡萄糖轉運蛋白6抗體 GLUT6
糖皮質激素受體β抗體 Glucocorticoid Receptor beta
胰島葡萄糖6磷酸酶2抗體 Glucose 6 phosphatase 2
葡萄糖氧化酶抗體 Glucose Oxidase
葡萄糖苷酶2β/Glucosidase IIβ抗體 Glucosidase 2 subunit beta
*脫氫酶2抗體 GLUD2
磷酸化*受體1抗體 phospho-GluR1 (Thr840)
γ-谷氨酰水解酶抗體 GGH
谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶抗體 Glutamyl Prolyl tRNA synthetase/ProRS
谷氧還蛋白2抗體 Glutaredoxin 2
谷氧還蛋白5抗體 Glutaredoxin 5
*過氧化酶2抗體 GPX2
*過氧化酶7抗體 GPX7
*S轉移酶α1抗體 GSTA1
*S轉移酶κ抗體 GSTK1

化受體結合**激酶2抗體IgG 大麥葉片原生質細胞分離試劑盒  0.2ml
Ai-Shrimp tropomyosin /FITC  熒光素標記南美白對蝦過敏原蛋白（蝦原肌球蛋白）抗體IgG 煙草葉片原生質細胞分離試劑盒  0.2ml
Ai-SIP1 /FITC  熒光素標記運動神經(jīng)元存活蛋白結合蛋白1抗體IgG 植物質粒菌化試劑盒  0.2ml
Ai-SIRT1/FITC  熒光素標記沉默調節(jié)蛋白1抗體IgG 純化葉綠體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-Phospho-SirT1 (Ser47) /FITC  熒光素標記磷酸化沉默調節(jié)蛋白1抗體IgG 植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-Phospho-SirT1 (Ser27)/FITC  熒光素標記磷酸化沉默調節(jié)蛋白1抗體IgG 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-Skp2/FITC  熒光素標記細胞S相激酶相關蛋白抗體IgG 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA高純分離試劑盒  0.2ml
Ai-SLC4A4/FITC  熒光素標記*協(xié)同轉運蛋白4-A4抗體IgG 植物細胞葉綠體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-Slc4a7/Nbcn1 /FITC  熒光素標記*協(xié)同轉運蛋白4-A7抗體IgG 大量植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-SLC6A19 /FITC  熒光素標記鉀依賴鈉鈣交換蛋白6IgG 通用型植物線粒體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-SLC16A3/MCT-4/FITC  熒光素標記MCT4抗體IgG 高多糖/酚植物線粒體DNA萃取試劑盒  0.2ml
Ai-Slc22A17/FITC  熒光素標記可溶性載質轉運蛋白22A17抗體IgG 植物基因組DNA純化試劑盒（低多糖/酚）  0.2ml
Ai-SLC24A5/FITC  熒光素標記可溶性載質轉運蛋白SLC24A5抗體IgG 植物基因組DNA純化試劑盒（高多糖/酚）  0.2ml
Ai-SLC33A1/FITC  熒光素標記乙酰*轉運蛋白1抗體IgG 果菜類食物DNA分離試劑盒  0.2ml
Ai-SLC34A2/NaPi-2b/FITC  熒光素標記磷酸鈉協(xié)同轉運蛋白抗體IgG 稻麥類食物DNA分離試劑盒  0.2ml
Ai-Slc26a5/Prestin/FITC  熒光素標記外毛細胞運動