【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱  大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞；RM1培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細(xì)胞系來源于一大鼠的肌肉組織。2007年由*昆明細(xì)胞庫建立。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)   15%FBS
傳代方法   1：2傳代；3-4天一次
傳代情況  P4
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法（-）
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
毒扁豆堿;依色林    Eserine;Physostol;PhysostigMine    57-47-6
毒毛旋花苷－G    NA    312619-45-7
對氨基苯磺酸鈉    SODIUM SULFANILATE    123333-70-0
4-氨基苯甲酸;對氨基苯甲酸    4-AMinobenzoic acid;PAPB;VitaMin Bx;VitaMine H1    150-13-0
對氨基*    4-AMINOBENZOIC ACID SODIUM SALT    555-06-6
1,4-苯二胺;對苯二胺;1,4-二氨基苯;烏爾絲D    1,4-PhenylenediaMine;p-PhenylenediaMine;1,4- DiaMinobenzene;1,4-BenzenediaMine;Ursol D    106-50-3
1.4-苯醌（+4℃）    1,4-Benzoquinone;p-Quinone;1,4-Cyclohexadienedione;p-Dioxybenzene    106-51-4
對稱二苯基偶氮羰酰肼    DIPHENYLCARBAZONE    538-62-5
對稱二苯硫脲    1,3-Diphenyl-2-thiourea    102-08-9
二苯乙炔    Diphenylacetylene;Diphenylethyne;1,1′-(1,2-Ethynediyl)bisbenzene    501-65-5人肌酐(Cr)免疫試劑盒    Human Creatinine,Cr ELISA kit
人饑餓激素(GHRL)免疫試劑盒    Human Ghrelin,GHRL ELISA Kit
人活性氧(ROS)免疫試劑盒    Human Reactive OXyen Species,ROS ELISA Kit
人活化素受體樣激酶1(ALK1)免疫試劑盒    Human Activin Receptor-Like Kinase 1,ALK1 ELISA Kit
人活化素A(ACV-A)免疫試劑盒    Human Activin A,ACV-A ELISA Kit
人活化凝血因X(FXa)免疫試劑盒    Human FXa ELISA kit
人活化凝血因Ⅻ(FⅫa)免疫試劑盒    Human activated coagulation factor Ⅻ,FⅫa ELISA Kit
人活化蛋白C(APC)免疫試劑盒    Human activated protein C,APC ELISA Kit