【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱  抗丙型肝炎病毒核心抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HCV-C39培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  半貼壁生長(zhǎng)
特征特性   可產(chǎn)生抗丙型肝炎病毒核心抗原的單克隆抗體 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%
傳代方法   1：4-1：8
傳代情況  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%牛血清+10%DMSO
支原體檢測(cè)  培養(yǎng)法（-）
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Gemin 6    脊髓肌癥蛋白Gemin6抗體
phospho-GFAP (Ser38)    磷酸化膠質(zhì)纖維酸蛋白抗體
GFI1    自主生長(zhǎng)因子GFI1抗體
GFPT1    *6-磷酸果糖轉(zhuǎn)移酶抗體
GSTT1    *S轉(zhuǎn)移酶θ抗體
GSTT2    *S轉(zhuǎn)移酶θ2抗體
GGT6    γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶6抗體
GZMA/Granzyme A    顆粒酶A抗體
Granzyme D/B/E/N/G/F/H    顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體
G-CSFR/CD114/GCSF Receptor    粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體抗體
GPA/GYPA/CD235a    血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體
GPATCH3    G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Antibiotic NO.5        
抗生素檢測(cè)培養(yǎng)基II    250g    用于拮抗劑檢測(cè)。
Antibiotic Agar No.2        
抗生素檢定培養(yǎng)基6號(hào)    250g    用于粘菌素等的效價(jià)測(cè)定
Antibiotic Agar NO.6        
麥迪、*檢定培養(yǎng)基（普通輕質(zhì)斜面培養(yǎng)基）    250g    麥迪（白）霉素效價(jià)測(cè)定
Wheat albomycin Test Medium        
*檢定培養(yǎng)基    250g    *效價(jià)測(cè)定
Azithromycin Test Medium        
支原體肉湯培養(yǎng)基（不含瓊脂和酚紅）    250g    用于支原體的增菌培養(yǎng)