天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )20 次原理產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )20 次原理產(chǎn)品介紹：

天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )20 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )20 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

〖級別〗：試劑級
總重量：138～142mg
λmax(1Tab/100ml)：336～346nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：片劑。Each tablets contain 10mg of ABTS for quick and easy preparation of substrate solution.
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)The product is supplied as a ready-to-use peroxidase substrate containing 2,2-azino-bis(3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic acid) in an acidic buffer.The substrate should be colorless prior to reaction with peroxidase.It will develop a blue-green reaction product when reacted with peroxidase in microwell applications(e.g.ELISA assays).For end-point assays,1% sodium dodecyl sulfate(SDS) may be used to stop the reaction.This will also result in a blue-green end product.Since this substrate produces a soluble reaction produet,it is not recommended for blotting or histochemical applications.
〖保存〗：-20℃
天青石藍(lán)
〖英文名稱〗：Celestine blue B；Celestine blue B；Mordant Blue 14；C.I. 51050
〖其他名稱〗：天青石蘭；媒介藍(lán)14；天青石藍(lán)B；媒染藍(lán)14
〖CAS號〗：1562-90-9
C17H18C1N3O4=363.80
〖級別〗：For microscopic
純度：≥80.0%
〖熔點〗：227～230℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：綠色粉末。在15℃時，水中溶解度為2％，無水乙醇中為2.25％，乙二醇中為6.5％，二甲苯中為0.005％。水溶液呈紅紫色，極稀時呈藍(lán)色。乙醇溶液在任何濃度均呈藍(lán)色。zui大吸收波長 630～640nm。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑，用于核細(xì)胞組織和結(jié)締組織染色?？纱嫣K木精，用于顯微鏡〖用途〗

天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )20 次原理滋養(yǎng)層細(xì)胞生長因子    6nt 隨機(jī)引物 ( 抗水解 )，0.5mM
5(6)-CFDA    菌素 D 溶液 ,1mg/mL
5(6)-TRITC    可溶性兩性霉素 B 溶液 ,20mg/mL
5-Carboxyfluorescein    *溶液 ,100mg/mL
5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester    *鈉溶液 ,50mg/mL
5-FITC    *溶液 ,100mg/mL
Acridine Orange(AO)    *溶液 ,100mg/mL
Actin-Tracker Green( 微絲綠色熒光探針 )    細(xì)胞松弛素 B 溶液 ,20mg/mL
BCECF AM    * A 溶液 ,10mg/mL
Calcein    菌酮溶液 ,100mg/mL
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