基礎(chǔ)*肉湯(TB 培養(yǎng)基)
絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在*(BSS)基礎(chǔ)上,添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,維生素的范圍亦很廣,另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,形成神經(jīng)生物學(xué)zui通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細(xì)胞,同MEM含有相同的營養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。選擇某種培養(yǎng)基,應(yīng)仔細(xì)了解成分表,應(yīng)知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足。例如,有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有*,而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域,但它對(duì)某些對(duì)*敏感的可能有細(xì)胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言,則并非*選擇,特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時(shí)。F12中含有*,據(jù)報(bào)道也有神經(jīng)毒效應(yīng)。
*肉湯(TB 培養(yǎng)基) 制備方法:
1. 培養(yǎng)同源細(xì)胞(未克隆前時(shí)的同一細(xì)胞)至半?yún)R合狀態(tài)時(shí),更換一次培養(yǎng)液,再繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時(shí)后,吸出所有培養(yǎng)液。
2. 離心:3000~4000/分離心10分鐘,吸取上清液。
3. 濾過:再經(jīng)直徑0.22μm濾孔的濾膜過濾,低溫凍存貯備用;用時(shí)取1分適應(yīng)培養(yǎng)基+2培養(yǎng)基混合使用。
生長因子絕大多數(shù)哺乳類胚胎神經(jīng)元有嚴(yán)格的營養(yǎng)要求,若不能提供適宜的生長因子或合適的因子組分,將會(huì)使絕大多數(shù)神經(jīng)元在體外培養(yǎng)的數(shù)天中死亡。解決這一問題有兩條思路,一是讓培養(yǎng)細(xì)胞提供自己的營養(yǎng)因子,二是在*肉湯(TB 培養(yǎng)基) 中加入純的生長因子。如果細(xì)胞混合物能在高密度時(shí)生長,所需的生長因子便會(huì)積累到可觀的數(shù)值,尤其當(dāng)培養(yǎng)基很少變化時(shí)。若某種細(xì)胞混合物生長時(shí)有很少的營養(yǎng)需求,可保持培養(yǎng)基在一段時(shí)間里不作任何變動(dòng),以使?fàn)I養(yǎng)(生長)因子積累,而zui后促使所需要的細(xì)胞類型能夠生長。但是,這種對(duì)營養(yǎng)(生長)因子自身倚賴性亦有弊端,因?yàn)橥ǔT诨旌霞?xì)胞群體中細(xì)胞很難有同比例增殖,某些細(xì)胞會(huì)因生長條件的貧乏而受限制。另外,這種方法只能進(jìn)行相當(dāng)高密度的細(xì)胞培養(yǎng)。因?yàn)榕囵B(yǎng)基的條件在細(xì)胞的較低密度時(shí)變的不夠有效。不過某些時(shí)候純化神經(jīng)元群體的低密度培養(yǎng)可用條件培養(yǎng)基(經(jīng)過了高密度培養(yǎng))進(jìn)行,或在膠質(zhì)上生長的神經(jīng)元所用過的培養(yǎng)基來支持。
滿足神經(jīng)元營養(yǎng)需求的第二條途徑是向培養(yǎng)基中加入生長因子。通常用于組培的通用適宜因子是神經(jīng)生長因子NGF。不過,只有少數(shù)對(duì)這種蛋白質(zhì)有反應(yīng)的細(xì)胞類型的細(xì)胞才能生長。
*肉湯(TB 培養(yǎng)基) 相關(guān)產(chǎn)品如下:hz0010 轉(zhuǎn)血小板基因倉鼠卵巢細(xì)胞,CHO-pt細(xì)胞
hz0011 含EGFP基因的CHO細(xì)胞,CHO-AA8細(xì)胞
hz0012 轉(zhuǎn)染了tk基因的SW038-C2細(xì)胞,SW038-C2-tk細(xì)胞
hz0013 轉(zhuǎn)染了microRNA-mock基因的陰性對(duì)照細(xì)胞,Hela-mock細(xì)胞
hz0014 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,3T3/Fas/com細(xì)胞
hz0015 轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系 CNE1-lmp\l細(xì)胞
hz0016 轉(zhuǎn)化的豚鼠胎體細(xì)胞,104C1細(xì)胞
hz0017 轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞,ZA6細(xì)胞
hz0018 轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞,ZA1細(xì)胞
hz0019 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細(xì)胞,15P-1細(xì)胞
hz0020 轉(zhuǎn)HLA-2基因B細(xì)胞,T2細(xì)胞
hz0021 磚紅鏈霉菌
hz0022 豬腎細(xì)胞系 PK15細(xì)胞
hz0023 豬腎細(xì)胞系 PK13細(xì)胞
hz0024 豬腎細(xì)胞系 IBRS-2細(xì)胞
hz0025 豬腎細(xì)胞,PK-15細(xì)胞,
hz0026 豬腎細(xì)胞,LLC-PK1細(xì)胞
hz0027 豬腎上皮細(xì)胞,PK15-EGFP-puro細(xì)胞
hz0028 豬腎上皮細(xì)胞,PK(15)細(xì)胞
hz0029 豬腎近曲小管上皮細(xì)胞,LLC-PK1細(xì)胞
hz0030 豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,PIEC細(xì)胞,
hz0031 豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種
hz0032 豬骨髓間質(zhì)干細(xì)胞,Pig MSC細(xì)胞
hz0033 豬睪丸細(xì)胞系 ST細(xì)胞
hz0034 豬肺泡巨噬細(xì)胞,3D4/21細(xì)胞
hz0035 豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞,PT-K75細(xì)胞
hz0036 皺褶青霉
hz0037 中華根霉
hz0038 中國倉鼠體細(xì)胞,R 1610(細(xì)胞
hz0039 中國倉鼠腎細(xì)胞(二氫*還原酶缺陷型) CHO/dhFr-細(xì)胞
hz0040 中國倉鼠卵巢細(xì)胞,CTLA4 Ig-24細(xì)胞
hz0041 中國倉鼠卵巢細(xì)胞,CHO細(xì)胞,
hz0042 中國倉鼠肺細(xì)胞,V79細(xì)胞
hz0043 中國倉鼠肺細(xì)胞,V79-4細(xì)胞