乳腺癌相關(guān)抗原抗體(antibody,Ab)是機(jī)體免疫系統(tǒng)受到抗原刺激后產(chǎn)生的特異性球蛋白,稱免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。根據(jù)其重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子結(jié)構(gòu)和抗原性的不同,可將為類Ig分為IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大類。由遺傳基因決定所產(chǎn)生的抗體,稱天然抗體(natural antibody),由抗原激發(fā)免疫細(xì)胞產(chǎn)生的抗體,稱免疫抗體(immune antibody)或稱特異地性抗體。人工制備的特異性抗體又可分為多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體三種類型。
檢測病原體常用的乳腺癌相關(guān)抗原抗體有人工制備的特異性多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體三種類型。
操作步驟:
1取適量Protein A+G Beads懸液,裝入層析柱,用10倍柱體積的PBS(或者TBS,下同)洗滌平衡層析柱。
2含抗體的血清或其它體液高速離心后,將上清與等體積2×PBS緩沖液混合,調(diào)整pH以及離子濃度后(確認(rèn)pH值為7±0.5),緩慢加入層析柱。
3用10倍柱體積以上的PBS洗滌,至流出液無蛋白檢出。
4加入2倍柱體積0.1 M 檸檬酸(Citrate Acid, pH 2.7)封閉流出管,靜置5分鐘后收集穿出液,重復(fù)三次。測定 OD280估算抗體濃度,如果所得抗體較多可以使用SDS-PAGE檢測純度。也可以選擇0.1 M*(Glycine, pH 3.0)洗脫。
5洗脫后的抗體立即加入2/5體積的1 M Tris,pH 9.0中和,使用Millipore蛋白濃縮管切換到所需緩沖液,或者透析,緩沖液通常為PBS含有0.02% NaN3以及1 mM EDTA。
6濃縮到所需體積,加入50%甘油;測定效價后,分裝并保存在-20℃,避免凍結(jié)。
相關(guān)產(chǎn)品如下:hz-11189R MRCK alpha/CDC42BPA CDC42結(jié)合蛋白激酶α抗體(MRCKα)
hz-11190R C9 補(bǔ)體C9抗體
hz-11191R MRF/C11orf9 髓鞘基因調(diào)控因子抗體
hz-11192R NG2/CSPG4 黑色素瘤*蛋白多糖4抗體
hz-11193R NSMase2 中性鞘磷脂2抗體
hz-11194R OLIG2 少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2抗體
hz-11195R ACL6B/BAF53b 肌動蛋白樣蛋白6B抗體
hz-11196R R Cadherin R Cadherin/CDH4
hz-11197R PRPH2 外周蛋白2抗體
hz-11198R ProSAPiP1 含*突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體
hz-11199R DBX1 腦發(fā)育同源蛋白1抗體
hz-11200R LHX2 調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化蛋白Lhx2抗體
hz-4238R ARNT2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體
hz-0045M AGT 血管緊張素原抗體
hz-4219R TBL1X 轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖蛋白抗體
hz-4110R GIT1 G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1
hz-4220R TBLR1/TBL1XR1 轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖受體蛋白1抗體
hz-11201R Musashi 1/Msi1 神經(jīng)干細(xì)胞RNA結(jié)合蛋白Musashi1抗體
hz-11202R NR2E1/Tailless 核受體蛋白NR2E1抗體
hz-11203R OCT6 八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6抗體
hz-11204R PAX6 轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體
hz-11206R PLAGL1/ZAC1 多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體
hz-11207R SOX22 核轉(zhuǎn)錄因子SOX22抗體
hz-11208R SOX4 核轉(zhuǎn)錄因子SOX4抗體
hz-11209R SUFU/Suppressor of Fused 抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體
hz-11210R DNAH9 軸絲動力蛋白重鏈9抗體
hz-5372R phospho-GIT1(Ser375) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1
hz-11211R KIF3A 驅(qū)動蛋白家族蛋白3抗體
hz-11212R KLC1/KNS2 驅(qū)動蛋白2抗體
hz-11213R LRRTM1 富含*重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白1抗體