實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
| 產(chǎn)品名稱 | |
| 英文名稱 | Yersinia spp. |
| 貨號 | BJ-R7371 |
產(chǎn)品特點：
1. 耶爾森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量：
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
野黃芩素英文名稱：Wild Radix et分子式：286.24分子量：C15H10O6：529-53-3
氯菊酯英文名稱：Chlorine and cyanide分子式：416.32分子量： C22H19Cl2NO3：52315-07-8
2-甲喹喔啉分子式：144.17英文名稱：2- methyl quinoxaline：7251-61-8分子量： C9H8N2
1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡分子式：120.11英文名稱：1H-1,2,3- three and [4,5-b]：273-34-7分子量： C5H4N4
4-甲氧吡分子式：109.13英文名稱：4- methyl group：620-08-6分子量： C6H7NO
雙(三氟-2,4-戊二酮)錳分子式：361.1英文名稱：Double (three fluoro -2,4- base manganese pentanedione)：20080-72-2分子量： C10H8F6MnO4
2-巰-5-庚噁二唑分子式：200.3英文名稱：2- mercapto -5- heptyl two with evil：66473-10-7分子量： C9H16N2OS
5-氯并三氮唑分子式：153.57英文名稱：5- three n：94-97-3分子量： C6H4ClN3
二氯(1,10-菲咯啉)銅分子式：314.66英文名稱：二氯（1,10 -菲咯啉）銅：14783-09-6分子量： C12H8Cl2CuN2
4-氟-3-甲溴鎂英文名稱：4- -3- methyl phenyl bromide分子式：213.33分子量： C7H6BrFMg：82297-89-0
2,3-二-5-(4-甲氧)氯四氮唑分子式：364.83英文名稱：2,3- two - -5- (4- methoxyphenyl) tetrazolium chloride：10560-45-9分子量： C20H17ClN4O
耶爾森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒小鼠卵巢顆粒細胞*培養(yǎng)基100mL
人眼脈絡(luò)色素瘤細胞谷氨酸棒桿菌Ⅹ型 Agrobacterium tumefaciens
Ni-Agarose Resin for 6x His-Tagged ProteinsNi瓊脂糖凝膠100ml國產(chǎn)gersion
大鼠肝細胞瘤細胞蘆葦短蠕孢霉 Brachysporium phragmitis
M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)泡盛曲霉 Aspergillus awamori
瑞士桿菌 Lactobacillus helveticus嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Neuronal Pentraxin II (NPTX2)
SS瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格： 250g 用途： 用于沙門氏菌和某些志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。(《中華人民共和國藥典》2010年版)
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum人腦微血管內(nèi)皮細胞
Yeast Protein Extraction Reagent/酵母蛋白抽提試劑25次、100次國產(chǎn)
