腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白抗體單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說(shuō)雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機(jī)會(huì)增加，同時(shí)可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純?cè)胶?，?yīng)根據(jù)所研究的抗原和實(shí)驗(yàn)室的條件來(lái)決定。
熒光素標(biāo)記
異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記FITC標(biāo)記抗體的原理是在堿性條件下，F(xiàn)ITC 的異硫氰基能與IgG的自由氨基結(jié)合，形成IgG與熒光素的結(jié)合物。FITC是zui常用的熒光素，其次選用TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明）。FITC和TRITC是常用的雙標(biāo)記組合。   腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白抗體其標(biāo)記步驟如下：
以碳酸鹽緩沖液（PH9.3，Na2CO3 8.6g，NaHCO3 17.3g，蒸餾水1000ml）調(diào)整抗體濃度至10mg/ml。
b. 取5ml抗體溶液置于10ml小燒杯中。
c. 稱(chēng)取1mg FITC溶于0.2ml DMSO中，待溶解后立即緩慢滴加于抗體液內(nèi)，邊加邊輕攪；其后室溫避光作用2小時(shí)。
d. 將交聯(lián)物經(jīng)Sephadex G25或G50柱層析除去游離的熒光素；分管收集*峰為標(biāo)記的抗體。
e. FITC的結(jié)合物質(zhì)量鑒定IgG量（mg/ml）=（OD280-OD495×0.35）/1.4F/P=2.87×OD495/（OD280-OD495×0.35），一般說(shuō)，F(xiàn)ITC對(duì)抗體的摩爾比為3：1時(shí)適合于組織切片染色，為5-6：1時(shí)適合于細(xì)胞懸液染色。以標(biāo)記抗體染色各種抗原，測(cè)定其特異性染色滴度和非特異染色的程度。
f. 標(biāo)記抗體的保存：宜保存于4℃，加NaN3防腐。
B、 異硫氰酸羅丹明（TRITC）標(biāo)記: 基本與FITC標(biāo)記相同。
公司產(chǎn)品詳情請(qǐng)參閱有關(guān)詳細(xì)論述鏈接點(diǎn)擊：          Human anti-cytomegalovirus IgM antibody,anti-CMV IgM 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgM（anti-CMV IgM）
Human anti-toxoplasma IgG antibody,anti-tox IgG 人抗弓形體IgM抗體（anti-tox IgM）
Human anti-rubella virus IgG antibody,anti-RV IgG 人抗風(fēng)疹病毒IgG抗體（anti-RV IgG）
Human anti-Epstein-Barr virus antibody,EBV 人抗EB病毒抗體（EBV）
Human progesterone receptor,PGR 人孕酮受體（PGR）
Human Neonatal Thyroid Stimulating Hormone,N-TSH 人新生兒促甲狀腺素（N-TSH）
Human Pregnancy Specificβ1Glycoprotein,SP1/PSβ1-G 人妊娠特異性β1糖蛋白（SP1/PSβ1-G）
Human placetal lactogen,PL 人胎盤(pán)泌乳素（PL）
Human Androgen Binding Protein,ABP 人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）
Human anti-trophoblast antibody,ATA 人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞抗體（ATA）
Human anti-zona pellucida antibody,aZP 人抗透明帶抗體（aZP）
Human Anti-Ovary Antibody,AOAb 人抗卵巢抗體（AOAb）
Human anti-cytomegalovirus IgG antibody,anti-CMV IgG 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgG（anti-CMV IgG）
Human basic fetoprotein,BFP 人堿性胎兒蛋白（BFP）
Human anti-rubella virus IgM antibody,anti-RV IgM 人抗風(fēng)疹病毒IgM抗體（anti-RV IgM）
Human oxytocin,OT 人催產(chǎn)素（OT）
Human pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A 人妊娠相關(guān)血漿蛋白A（PAPP-A）
Human Endometrium Antibody,EMAb 人抗子宮內(nèi)膜抗體（EMAb）
Human anti-sperm antibody,AsAb 人抗精子抗體（AsAb）
Human Herpes Gestation,HG 人妊娠皰疹抗體（HG）
Human placenta growth factor,PLGF 人胎盤(pán)生長(zhǎng)因子（PLGF）
Mouse FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L 小鼠FMS樣*激酶3配體（Flt3L）
Mouse glucoprotein 130,gp130 小鼠糖蛋白130（gp130）
Mouse Interferon γ ,IFN-γ Kit 小鼠γ干擾素（IFN-γ）
Mouse Insulin-like growth factor 2,IGF-2 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子2（IGF-2）
Mouse Anti-glucoprotein 210,GP210 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體（gp210） 
    必須強(qiáng)調(diào)的是在使用同位素標(biāo)記單抗或其他蛋白之前，應(yīng)掌握同位素操作和防護(hù)知識(shí)。正常情況下應(yīng)包括避免物理的接觸和對(duì)γ-射線(xiàn)照射的有效保護(hù)，操作和使用同位素標(biāo)記抗體時(shí)，應(yīng)利用防護(hù)裝置，并合理處置含放射性的廢料。
碘標(biāo)記用碘標(biāo)記抗體是一種有效的標(biāo)記方法。125I衰變產(chǎn)生低能的γ和Χ射線(xiàn)，很容易被檢測(cè)出來(lái)，而其60天的半衰期保證足夠的有效使用期，且能很方便地處理放射廢料。zui常用的碘標(biāo)記方法是氯胺T法，即將氧化劑氯胺T加入到抗體和碘化物的溶液中，Na125I在氯胺T作用下I轉(zhuǎn)化成I2，游離I2可與抗體分子中*和一些*發(fā)生鹵化反應(yīng)，用還原劑和游離*終止反應(yīng)，經(jīng)凝膠過(guò)濾將標(biāo)記的抗體與碘化*及還原劑分離開(kāi)。其主要操作步驟如下：
a. 在進(jìn)行標(biāo)記之前，先選用截流分子量為20000-50000的凝膠，制備1ml凝膠柱，然后分別用10倍體積的1%BSA/PBS/0.02%疊氮鈉和PBS洗滌柱體，封住柱下口，備用。
b. 加入10ug純化單抗至含有25ul 2.5mol/L磷酸鈉（PH7.5）的1.5ml指形管內(nèi)。隨后，加入500uCi Na125I混勻。
c. 加入25ul新配制的2mg/ml氯胺T。室溫放置60秒。再加入50ul氯胺T終止液（含2.4mg/ml偏重亞硫酸鈉，10mg/ml*，10%甘油和0.1%環(huán)乙烷酰二甲苯的PBS）。
d. 將上述碘標(biāo)記物上樣在凝膠柱表面，小心放開(kāi)柱體下口，用1.5ml指形管收集。當(dāng)?shù)鈽?biāo)記物全部進(jìn)入柱體，加入0.3ml含0.03%疊氮鈉的PBS，用另一指形管收集0.3ml，然后再加0.3ml 0.03% NaN3 PBS，下口收集0.3ml，重復(fù)進(jìn)行，同時(shí)用同位素檢測(cè)儀測(cè)定標(biāo)記與未標(biāo)記的單抗。標(biāo)記抗體大約在第二至第四管出現(xiàn)。無(wú)害化處理柱子和非單抗標(biāo)記部分。e. 將標(biāo)記單抗保存于4℃可使用6周時(shí)間。
B、 生物合成法標(biāo)記將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)在含有放射性前體的培養(yǎng)基中，隨著抗體分子的合成、組裝，同位素會(huì)標(biāo)記在抗體分子的初級(jí)氨基酸鏈上，本方法不會(huì)導(dǎo)致抗體活性的喪失。其主要步驟是：
離心收集處于對(duì)數(shù)生*的雜交瘤細(xì)胞，約需2×106個(gè)細(xì)胞。以預(yù)熱37℃不含*的培養(yǎng)基洗滌上述細(xì)胞。
b. 用含2% PBS不含*的培養(yǎng)基懸浮雜交瘤細(xì)胞至106個(gè)/ml，加入35S*（每次加入100uCi可產(chǎn)生105-106cpm的抗體）。
c. 經(jīng)C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜，離心后，吸出培養(yǎng)上清，分別加入1/20體積的1mol/L Tris（PH8.0）及疊氮鈉至濃度0.02%。該標(biāo)記抗體可按純化單抗方法進(jìn)行。