細(xì)胞名稱BE(2)-M17（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）

　　種屬人

　　年齡（性別）男；2歲

　　組織來源

　　生長特性貼壁

　　細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)母細(xì)胞樣

　　背景描述BE(2)-M17細(xì)胞是源自一位2歲患有神經(jīng)母細(xì)胞瘤男童的骨髓，是SK-N-BE(2)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的一個克隆；BE(2)-M17細(xì)胞多層生長，隨著培養(yǎng)時間細(xì)胞會聚集、漂浮。

　　生長培養(yǎng)基MEM/F12＋10%FBS＋1%P/S

　　培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

　　常見問題

　　1.收貨時細(xì)胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

　　受到運(yùn)輸影響，懸浮細(xì)胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復(fù)正常。一些細(xì)胞在運(yùn)輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。

　　2.培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？

　　少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

　　3.培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？

　　少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

　　4.培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

　　β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。

　　5.鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

　　懸浮細(xì)胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細(xì)胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度。

　　|注意事項

　　1.細(xì)胞養(yǎng)不好，可能的原因有，THP-1細(xì)胞特別依賴細(xì)胞濃度，ATCC上10 5到106每ML，是一個很高的密度，細(xì)胞少了就不太容易養(yǎng)好。

　　2.細(xì)胞株的來源很重要，如直接來源于ATCC（American Type Culture Collection美國模式菌種保藏中心）生命力要強(qiáng)于國內(nèi)細(xì)胞庫的。

　　3.注意細(xì)胞的密度一定要高，介于5×10^5——10^6/mL之間，增值的快。細(xì)胞數(shù)量太少，不適合THP-1生長，一般狀態(tài)不好的THP-1在培養(yǎng)了3天后數(shù)量仍然不多，繼續(xù)培養(yǎng)一天或者兩天，培養(yǎng)基嚴(yán)重泛黃，細(xì)胞數(shù)會增加。這一點(diǎn)不同于同是單核細(xì)胞系的U937細(xì)胞。

　　4.THP-1細(xì)胞適合在細(xì)胞Ph環(huán)境偏酸性環(huán)境生長，對培養(yǎng)基變化非常敏感，所以盡量使用相同Ph的1640。

　　5.傳代后切忌常移出培養(yǎng)箱觀察，否則會影響細(xì)胞生長，狀態(tài)變差，一般首先表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)顆粒變多。一般THP-1生長相當(dāng)快，對于狀態(tài)已經(jīng)不好的情況，建議傳代后3～4天再觀察，一般4天時間培養(yǎng)基已明顯泛黃，細(xì)胞數(shù)量巨增;1)THP-1細(xì)胞喜歡酸性條件，你不要老是換培養(yǎng)基。越酸的條件，細(xì)胞密度越大，細(xì)胞就長得越好;2）不要頻繁換液，一般2-3次換液離心一次（只是補(bǔ)充培養(yǎng)基）3）使用1640（ATCC推薦），注意加碳酸氫na2.5g就可以了，寧酸勿堿;4）注意凍存的時候密度大些，推薦用血清凍存。

　　6.復(fù)蘇比較慢，建議開始用小瓶，不要用一次性的。

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