PrimaCell™人少突膠質(zhì)細(xì)胞試劑盒
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人少突膠質(zhì)細(xì)胞試劑盒培養(yǎng) |
英文名稱 |
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貨號 | EYX99546 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明;
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
運(yùn)輸和保存;
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
操作要點(diǎn);
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
小鼠轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)ELISA試劑盒 ,英文名: ATF5 ELISA Kit 66575-29-9佛司可林規(guī)格 Forskolin
犬雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒CanineEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T 29070-92-6茯苓酸 Pachymic acid
犬胸腺基質(zhì)細(xì)胞生成素(TSLP)試劑盒 Dog TSLP ELISA Kit 303-98-0輔酶Q10說明書 Coenzyme Q10
英文名稱Humaissue-typePlasminogenActivator(t-PA)ELISAkit人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 58749-22-7甘草查爾酮A品牌 Licochalcone A
*AP酶聯(lián)檢測封閉溶液10毫升 58749-23-8甘草查爾酮B規(guī)格 Licochalcone B
64421-28-9山梔苷甲酯說明書 Dipsacoside B 組蛋白H2A-T1201酸化檢測試劑盒10/20等
6426-43-3蒲公英甾醇乙酸酯 Taraxasteryl acetate 組蛋白H2A-K9乙?;瘷z測試劑盒10/20等
63902-38-5松酯醇二葡萄糖苷品牌 Pinoresinol diglucoside 組蛋白H2A-K5乙?;瘷z測試劑盒10/20等
637349-03-2偽原纖細(xì)薯蕷皂苷 Pseudoprotogracillin 總抗氧化能力(TAC)終點(diǎn)比色法定量檢測試劑盒50
635-65-4膽紅素規(guī)格 Bilirubin 總膽汁酸(TBA)定量檢測試劑盒20
腸桿菌EE營養(yǎng)肉湯500毫升 79484-75-6刺五加苷D規(guī)格 Eleutheroside D
Ratgalanin,GALELISA試劑盒大鼠甘肽/甘素(GAL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 39432-56-9刺五加苷E Eleutheroside E
小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒 ,英文名: HIS ELISA Kit 104777-68-6大車前苷說明書 Plantamajoside
小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA檢測試劑盒MousecoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit 96T/48T 552-66-9大豆苷品牌 Daidzin
人抗白蛋白抗體(AAA)試劑盒 Human ai-albumin aibody,AAA ELISA Kit 486-66-8大豆苷元規(guī)格 Daidzein
PrimaCell™人少突膠質(zhì)細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)2182-14-1文多靈 Vindoline 英文名稱Ratprogesterone(PROG)ELISAkit大鼠孕同(PROG)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
2174-59-65-去甲川陳皮素說明書 5-Demethylnobiletin 英文名稱Ratprogesterone(PROG)ELISAkit大鼠孕同(PROG)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
21637-25-2異槲皮苷 Isoquercitrin 英文名稱RatPro-ANP(1-98)ELISAKit大鼠心肽Pro-ANP(1-98)規(guī)格:96T/48T
21339-55-9相思子堿規(guī)格 Abrine 英文名稱RatPro-ANP(1-98)ELISAKit大鼠心肽Pro-ANP(1-98)規(guī)格:96T/48T
212701-97-8噻嗪二酮 Xanthiazone 英文名稱RatPRLELISAKit大鼠催乳素(PRL)規(guī)格:96T/48T
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