PrimaCell™人前列腺上皮細胞試劑盒
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人前列腺上皮細胞試劑盒說明書 |
英文名稱 |
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貨號 | EYX99519 |
實驗要點及說明；
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作要點；
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
英文名稱Mouse6-keto-prostaglandinelisakit小鼠6-同-前列腺素(6-keto-prostaglandin)規(guī)格：96T/48T 6989-21-5蒼術(shù)酮 Atractylon
茶葉維生素U(S-Methylmine)比色法定量檢測試劑盒20 107668-79-1草烏甲素說明書 Bulleyaconitine A
Ratfreechorionicgonadoopin,f-βCGELISA試劑盒大鼠游離β絨毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 28808-62-0梣酮品牌 Fraxinellone
小鼠組蛋白脫乙?；?/span>1(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit 查斯曼林規(guī)格 Chasmanine
山羊白介素10(IL-10)ELISA檢測試劑盒GoatIerleukin10,IL-10ELISAKit 96T/48T 482-45-1異歐前胡素 Isoimperatorin
84605-18-5環(huán)黃芪醇說明書 Cycloastragenol 組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20
84272-85-55-O-甲基維斯阿米醇苷說明書 5-O-Methylvisammioside 組織HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20
84-26-4吳茱萸堿說明書 Rutecarpine 組織HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20
84104-71-2雷公藤內(nèi)酯甲別名：規(guī)格 Wilforlide A 組織HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20
83-95-4茵芋堿說明書 Skimmianine 組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定性檢測試劑盒20
Ratglucocoicoidreceptor,GRELISA試劑盒大鼠糖皮質(zhì)類受體(GR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 13657-68-6莪術(shù)二酮品牌 Curdione
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR/CD71 ELISA Kit 17910-09-7莪術(shù)烯規(guī)格 Curzerene
小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA檢測試劑盒Mousecardioophln1,CT-1ELISAKit 96T/48T 474-25-9鵝去氧膽酸 Chenodeoxycholic acid
人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)試劑盒 Human IerferonαAibody,IFNα-Ab ELISA Kit 474-25-9鵝去氧膽酸說明書 Chenodeoxycholic acid
Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 516-35-8?；蛆Z去氧膽酸品牌 Taurochenodeoxycholic acid
PrimaCell™人前列腺上皮細胞試劑盒說明書143-67-9硫酸長春堿品牌 Vinblastine sulfate 英文名稱RatHeatShockProtein20ELISAKit大鼠熱休克蛋白20(HSP20)規(guī)格：96T/48T
142998-47-8丹酚酸D說明書 Salvianolic acid D 英文名稱RatHCYELISAKit大鼠同型半胱氨(HCY)規(guī)格：96T/48T
142998-47-8丹酚酸D品牌 Salvianolic acid D 英文名稱RatHCGELISAKit大鼠絨毛促性腺激素(HCG)規(guī)格：96T/48T
1429-30-7氯化矮牽牛素規(guī)格 Petunidin Chloride 英文名稱RatHCGELISAKit大鼠絨毛促性腺激素(HCG)規(guī)格：96T/48T
14259-55-3去乙?；嚾~草苷酸說明書 Desacetyl asperulosidic acid 英文名稱RatHbA1cELISAKit大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)規(guī)格：96T/48T
