細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人星形膠質(zhì)瘤細胞株；U87R-DOX培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人星形膠質(zhì)瘤細胞株；U87R-DOX培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮樣
生長特性貼壁生長
特征特性該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳代方法1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況C5
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
注意事項：
?1.一般客戶拿到人星形膠質(zhì)瘤細胞株；U87R-DOX培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-Kif14protein/FITC熒光素標記驅(qū)動蛋白家族Member14蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Kiss-1/FITC熒光素標記腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-KIF17/FITC熒光素標記驅(qū)動蛋白家族KIF17抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-PFK2/PFKFB3/FITC熒光素標記6磷酸果糖激酶2抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Phospho-PFK2(Ser466)/FITC熒光素標記磷酸化6磷酸果糖激酶2抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-KLF2/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白2抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-Klf4/FITC熒光素標記腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白K抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-KLF5/FITC熒光素標記腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-KLF6/FITC熒光素標記轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-KLF8/FITC熒光素標記KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人星形膠質(zhì)瘤細胞株；U87R-DOX培養(yǎng)*Anti-CD158e/KIR3DL1/FITC熒光素標記NK細胞抑制性受體3DL1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD158i/KIR2DS4/FITC熒光素標記NK細胞抑制性受體2DS4抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD147/EMMPRIN/FITC熒光素標記細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD151/MER2/PETA-3/FITC熒光素標記CD151抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD155/PVR/FITC熒光素標記CD155抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD160/By55/FITC熒光素標記NK細胞受體BY55抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD161/NK1.1/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠CD161抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD163/M130/FITC熒光素標記CD163抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD166/ALCAM/FITC熒光素標記活化白細胞粘附分子抗體IgG規(guī)格：0.2ml
*Anti-CD167a/DDR1/FITC熒光素標記CD167a抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細胞之方法：
人星形膠質(zhì)瘤細胞株；U87R-DOX培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
