細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長特性貼壁生長

特征特性該細(xì)胞是H.Kuramoto1968年分離的HEC-1-A細(xì)胞亞株。不同於HEC-A-1的是：該亞株在培養(yǎng)第135天到190天之間表現(xiàn)出穩(wěn)定的生長周期，且重現(xiàn)扁平，與親本細(xì)胞系相比更具鋪路石式樣。此外主要染色體組是親本細(xì)胞的兩倍。

培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況P(131+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-CXCL13/BLC-1/FITC熒光素標(biāo)記B-淋巴細(xì)胞趨化因子抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCL14/FITC熒光素標(biāo)記CXC趨化因子14抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCL15/Lungkine/FITC熒光素標(biāo)記趨化因子CXCL15體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCL16/FITC熒光素標(biāo)記CXC趨化因子16抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXC-R1/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXC-R2/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCR3/CD183/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體/G蛋白偶聯(lián)受體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCR3/CD183(rat,mo)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗大、小鼠細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCR5/CD185/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體5抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CXCR6/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體6抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B培養(yǎng)*Anti-TEM8腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-TERT端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-TETRODOTOXIN(TTX)素抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-TP-1/TEP1端粒酶相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Tetraspan5四分子交聯(lián)體5抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-TFF2三葉肽因子2抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-TFF3三葉肽因子3抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-TIF1Alpha/TRIM24轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-TIF1beta/KAP1轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-TIF1beta(Ser824)磷酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體規(guī)格：0.1ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。