冷凍保存細(xì)胞之方法：
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910培養(yǎng)
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)

特征特性該細(xì)胞系來源于一少精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

傳代方法1:2傳代；5-6天一次

傳代情況P4

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè)熒光法（-）

STR-

同工酶

染色體

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
HPRI*人胎盤核糖核酸抑止劑規(guī)格48T/96T

PP*人胎盤蛋白規(guī)格48T/96T

HPL*人胎盤催乳素規(guī)格48T/96T

HBF*人胎兒血紅蛋白規(guī)格48T/96T

FK506*人他克莫司規(guī)格48T/96T

TREM-1*人髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1規(guī)格48T/96T

MBP*人髓鞘堿性蛋白抗體規(guī)格48T/96T

MBP*人髓磷脂堿性蛋白規(guī)格48T/96T

人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG*人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG規(guī)格48T/96T

MPO*人髓過氧化物酶規(guī)格48T/96T
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0910培養(yǎng)phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide磷酸化蛋白激酶B抗原（絲氨酸磷酸化位點(diǎn)：473）0.5mgphospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473

peptaide磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗原phospho-AMPKalpha1(Thr172)peptaide磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗原1mgphospho-AMPKalpha1(Thr172

peptide磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗原phospho-AMPKalpha-1/PRKAA1(Thr198)peptide磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗原1mgphospho-AMPKalpha-1/PRKAA1(Thr198

phospho-AR/androgenreceptor(p-Ser580)peptide雄激素受體（多肽）0.5mgphospho-AR/androgenreceptor(p-Ser580

磷酸化活化復(fù)制因子2抗原phospho-ATF2(pSer490/pSer498)磷酸化活化復(fù)制因子2抗原0.5mgphospho-ATF2(pSer490/pSer498

磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體phospho-BAD(pSer128)磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體0.5mgphospho-BAD(pSer128

phospho-CREB-1磷酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（多肽）0.1mgphospho-CREB-1磷酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（多肽

抗原phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotictranslationinitiationfactor4E)磷酸化eIF-4E（Ser209）抗原0.5mgphospho-eIF4E(pSer209
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