冷凍保存細(xì)胞之方法：
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0908說(shuō)明書(shū)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱(chēng) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0908說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)
特征特性該細(xì)胞系來(lái)源于一無(wú)精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
傳代方法1:2傳代；5-6天一次
傳代情況P2
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)熒光法（-）
STR-
同工酶
染色體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0908說(shuō)明書(shū)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶(hù)拿到EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0908說(shuō)明書(shū)后，應(yīng)該注意什么？
客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶(hù)造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
MTF*人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白規(guī)格48T/96T
MAP-2*人微管相關(guān)蛋白2規(guī)格48T/96T
MAP-2*人微管相關(guān)蛋白2規(guī)格48T/96T
omentin*人網(wǎng)膜素規(guī)格48T/96T
AOPP*人晚期氧化蛋白產(chǎn)物規(guī)格48T/96T
RAGE/AGER*人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體規(guī)格48T/96T
AGEs*人晚期糖基化終末產(chǎn)物規(guī)格48T/96T
extein*人外顯肽規(guī)格48T/96T
SA*人唾液酸規(guī)格48T/96T
DUTP*人脫氧尿三磷酸規(guī)格48T/96T
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0908說(shuō)明書(shū)蛋白酶活化受體4/前列腺細(xì)胞凋亡反應(yīng)蛋白4抗原PAR4(protease-activatedreceptor4)蛋白酶活化受體4/前列腺細(xì)胞凋亡反應(yīng)蛋白4抗原0.5mgPAR4(protease-activatedreceptor4
磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗原p-Arhgef2/GEF-H1(Rhoguaninenucleotideexchangefactor2,pSer810)磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗原0.5mgp-Arhgef2/GEF-H1(Rhoguaninenucleotideexchangefactor2,pSer810
PARP(polyADP-ribosepolymerase)N-Terminus多腺苷二磷酸多聚酶抗原(N端)0.5mgPARP(polyADP-ribosepolymerase
多腺苷二磷酸多聚酶抗原PARP(polyADP-ribosepolymerase)多腺苷二磷酸多聚酶抗原0.5mgPARP(polyADP-ribosepolymerase
Parvalbumin微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原Parvalbumin微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原0.5mgParvalbumin微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原
配對(duì)盒基因8抗原PAX8(Pairedboxgene8)配對(duì)盒基因8抗原0.5mgPAX8(Pairedboxgene8
配對(duì)盒基因9抗原PAX9(Pairedboxgene9)配對(duì)盒基因9抗原0.5mgPAX9(Pairedboxgene9
內(nèi)脂素/B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子PBEF(CT)內(nèi)脂素/B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子0.5mgPBEF(CT
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