DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 細(xì)胞直接PCR裂解液
【單瓶試劑，細(xì)胞裂解+PCR一步到位】
產(chǎn)品關(guān)鍵詞：
Viagen Biotech; DirectPCR® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K蛋白酶K；302-C (301-C)；
產(chǎn)品介紹：
Viagen DirectPCR® DNA Extraction System（DirectPCR® DNA提取系統(tǒng)）是一種單管系統(tǒng)，用于從小鼠尾巴，耳片，卵黃囊和培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)快遞制備DNA。Viagen Biotech, Inc科學(xué)家開發(fā)的組分（正在申請）允許用DirectPCR® DNA Extraction System獲得的DNA提取物與基因分型用的基因組PCR兼容。生物樣本的粗提物與許多分子生物學(xué)級的試劑比如PCR都難以兼容，部分原因在于粗提物內(nèi)含有抑制劑。DirectPCR®不僅介導(dǎo)生物樣品的快速裂解，而且含有抑制劑，能夠有效抑制PCR擴(kuò)增用粗提裂解物中存在的抑制效應(yīng)，同時(shí)zui大程度保持釋放出來的基因組DNA的完整性。申請中的DirectPCR®操作起來，*消除任何溶液轉(zhuǎn)移或開管步驟，根本上節(jié)省了大量時(shí)間和精力。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1） 省時(shí)：更少的動手時(shí)間；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；
2） 省錢：僅需成本的反應(yīng)流程；
3） 安全：無有機(jī)試劑；
4） 環(huán)保：更少消耗（有機(jī)試劑，管子，槍頭等等）
5） 可靠有效：100%成gong率保證高產(chǎn)量
詳細(xì)流程：
1） 10cm細(xì)胞培養(yǎng)板細(xì)胞，使用添加新鮮制備的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR® Lysis Reagent (Cell) 細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞。蛋白酶K在DirectPCR®中穩(wěn)定保存~24h。如果處理少量細(xì)胞，會很難稱量蛋白酶K powder，可直接使用Viagen提供的基因組PCR級的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用濃度為0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）?！咀⒁狻浚喝羰褂眯×考?xì)胞，可用去離子水稀釋DirectPCR®高達(dá)10倍，然后使用合適更多體積的裂解液用于PCR。見表1，DirectPCR® Lysis Reagent (Cell) 起始使用條件。
2） 置于旋轉(zhuǎn)雜交爐中，55℃轉(zhuǎn)動管子處理5-6h或直到看不見組織團(tuán)。若有必要，能過夜裂解樣本，不會影響效率。*裂解至關(guān)重要。要想獲得更具有重復(fù)性的結(jié)果，中途搖動一下瓶子以更換管子的位置一次，在處理2-3h之后。
3） 水浴鍋內(nèi)85℃孵育粗提液45min?！究蛇x】于步驟4）前離心10s沉淀毛發(fā)。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不會降低效率。
4） 每50μl PCR反應(yīng)體系加入0.5-1.0μl裂解液。推薦PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。
表1，DirectPCR® Lysis Reagent (Cell)起始使用條件。
plate (# cells) | Tube size (ml) | DirectPCR-Cell (μl) | Dilution (fold) | Lysates (μl)/50μl PCR rxn |
96 well* | 0.75 | 50-70 | 1 | 1-1.5 |
96 well** | 0.75 | 60-80 | 2 | 2-3 |
24 well* | 0.75 | 70-100 | 1 | 1-1.5 |
6 well* | 0.75 | 100-140 | 1 | 1-1.5 |
10cm* | 1.5ml | 200-300 | 1 | 1-1.5 |
* Lysis using rotation hybridization oven.
** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted. Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs. Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.
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品牌 | 名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell) | 301-C | 50ml |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell)) | 302-C | 100ml |
Viagen Biotech | Genomic PCR Grade Proteinase K Solution | 501-PK | 5ml |
DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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