士鋒生物福林酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量

2014年07月02日 07:46上海士鋒生物科技有限公司點擊量：1274

一、原理：蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng)，生成深藍色復(fù)合物。藍色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比?？捎梅止夤舛扔嬘?00nm波長下進行測定。與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，而確定蛋白質(zhì)含量。

二、試劑與材料

標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液(250ug/ml)：酪蛋白預(yù)先用微量凱氏定氮法測定純度，再稱量制備。也可用250ug/ml牛血清蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

福林酚試劑：吸取試劑A(0.2M氫氧化鈉與4%無水碳酸鈉溶液等體積混合)100ml，加入試劑B(2%酒石酸鉀鈉溶液與1%五水硫酸銅等體積混合)2ml混合而成。

福林酚試劑乙：吸取5ml苯酚試劑加入5ml蒸餾水稀釋而成。

分光光度計、恒溫水浴槽、蛋白質(zhì)樣品

三、操作方法

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：分別吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液于小試管中，分別加進不同量的蒸餾水，補足到1ml。各加入5ml試劑甲，混勻后于室溫下(25℃左右)放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即混勻，于室溫下反應(yīng)30min。于500nm波長下測定光密度。以吸光值作為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2、樣品蛋白質(zhì)含量的測定

取1ml樣品溶液，加入5ml試劑甲，混勻，于25℃左右放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即搖勻，于25℃左右反應(yīng)30min，測定吸光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品蛋白質(zhì)含量。

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