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小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

2013年09月23日 11:00通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：2070

 小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

 
 
實(shí)驗(yàn)方法原理 將小鼠的肝細(xì)胞從機(jī)體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。
實(shí)驗(yàn)材料小鼠
試劑、試劑盒DMEM無血清DMEM培養(yǎng)基胰酶PBS
儀器、耗材飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器
實(shí)驗(yàn)步驟
一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備 
 
1.  動(dòng)物：小鼠。
 
2.  試劑：DMEM（含血清）、無血清DMEM培養(yǎng)基、胰酶、PBS。
 
3.   器械：飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網(wǎng)、離心管（15/50 ml）、6孔培養(yǎng)板、吸管、移液管、手套、微量加樣器。
 
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)4.  準(zhǔn)備：酒精擦拭臺(tái)面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風(fēng)機(jī)吹至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
 
二、方法 
 
1.   將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。
 
2.   剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物，轉(zhuǎn)移到另一個(gè)盛有PBS液的平皿中。
 
2.3 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊（大小約1mm2），玻片研磨，轉(zhuǎn)到離心管，離心（1 000 rpm，5 min）。
 
4.  視組織或細(xì)胞量加入5-6倍（3-5 ml）胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細(xì)胞分離。
 
5.   加入3-5 ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。
 
6.   用100目孔徑濾網(wǎng)濾過，除去未消化的大組織塊。
 
7.   再次離心5 min，棄上清液。
 
小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)8.   加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。
 
9.  加入含血清的培養(yǎng)液1-2 ml（視細(xì)胞量），血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
 
10.   將細(xì)胞調(diào)整到5×105/ml左右，轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中，37℃下培養(yǎng)。
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