凱氏法測(cè)定非蛋白質(zhì)氮的測(cè)定

2025年04月25日 09:12南京沃拓儀器設(shè)備有限公司點(diǎn)擊量：2

因?yàn)榈鞍踪|(zhì)中的含氮量相當(dāng)恒定（約14%一18%），平均含量約為16%。因此，凱氏法測(cè)定蛋白質(zhì)氮乘以6.25%即為蛋白質(zhì)含量。
用以下方法直接測(cè)定（凱氏法）。
測(cè)定的流程是，稱取0.2-0.5g風(fēng)干的植物材料，放入100ml燒杯中，加入50ml水，煮沸5min，在40-50℃下保溫30min。徐徐加入10ml6%硫酸銅，搖勻，靜置lh（或過(guò)夜）。過(guò)濾，殘?jiān)磩P氏定氮法將殘?jiān)麴s，測(cè)定收集液中氨，計(jì)算得出含氮量。非蛋白質(zhì)氮包括溶于水的氮化物，如氨基酸、酸性氮和有機(jī)含氮堿等。

非蛋白質(zhì)氮總量=總氮—蛋白質(zhì)氮計(jì)算得出

也可以按下法測(cè)定，即：稱取0.2-0.5g植物樣品，放入研缽中加2ml水，研磨成勻漿態(tài)。加入3ml3%硫酸銅溶液，搖勻，勻漿轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，同時(shí)以8ml水沖洗凈殘?jiān)?
離心管放入沸水中，用玻璃棒攪拌3min。取出加入3ml0.2mol/L的NaOH，攪勻，靜放10min，離心。將溶液放入100ml凱氏瓶中，用熱水沖洗沉淀2次，每次用10ml，每次沖洗時(shí)要向沖洗的水中加人l滴3%的硫酸銅溶液。
然后向凱氏瓶的浸出物中加入2ml濃硫酸，O.3m110%鉬酸鈉（10gNa2MoO4·2H2O溶解于100m1水中，加入0.5ml2mol/LNaOH，加熱至沸，并煮沸15min，冷卻后補(bǔ)充無(wú)氨水100ml），4滴3%過(guò)氧化氫。放在電爐上蒸發(fā)，直至出現(xiàn)泡沫，然后降低溫度以免泡沫濺到瓶頸上。繼續(xù)用微火加熱直至硫酸出現(xiàn)白色蒸汽。
之后用球形玻璃塞塞上凱氏瓶口，增強(qiáng)火力，消化到溶液透明為止。冷卻后向瓶中殘留物加入10ml水。溶液轉(zhuǎn)人50ml容量瓶中，用水沖洗殘?jiān)?，并補(bǔ)加水到50ml，混勻。取25ml溶液放人燒杯中滴定。加1滴0.1%甲基橙溶液，冷卻后，以2mol/LNaOH溶液滴定，直到指示劑呈現(xiàn)黃色為止，不能滴定過(guò)頭。然后加10ml含有溴酸鉀的pH6.7的磷酸緩沖液和5ml0.12mol/L氯氨溶液（15g氯氨溶于水中，用水稀釋到1L，混勻，用棉花過(guò)濾后，裝入暗色瓶中），即用玻璃蓋蓋住燒杯，以圓周運(yùn)動(dòng)方式將溶液混勻，并靜置25min，其后加入2ml2%溶液，10m18%草酸溶液。
在有淀粉指示劑存在下，用0.02mol/L溶液滴定釋放出來(lái)的的碘。1ml0.02mol二相當(dāng)于0.09338mg氮。另按此法設(shè)不加樣品的對(duì)照，操作步驟與上相同。

最后按下面公式計(jì)算樣品中的非蛋白氮含量。

X（非蛋白氮含量%）=[0.4667×50×K×（6z-6）1/（25×7n）=[0.9338×K×（a-b）]/72

式中：

50為試液體積（ml）；

25為用氯氨法測(cè)定時(shí)所取試液的體積（ml）；

a為滴定對(duì)照所用去的0.02mol二體積（ml）；

b為滴定試液所用去的0.02mol/L體積（ml）；

K為溶液的滴定度372為分析的樣品重。

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