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2023年11月20日 13:21上海古朵生物科技有限公司點(diǎn)擊量:444
古朵快訊:酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇
在免疫酶技術(shù)中,首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因?yàn)槊笜?biāo)記物濃度的很小變化,便可導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的波動(dòng)。另外,由于濃度過(guò)高,可使非特異性反應(yīng)增加,而濃度過(guò)低又可影響測(cè)定的敏感性。因此,正式試驗(yàn)前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度。
(一)酶標(biāo)記抗體的滴定方法:將抗原(或抗體)物理吸附于固相載體上,然后將經(jīng)過(guò)一系列稀釋的酶標(biāo)抗體(或抗Ig抗體)與吸附在載體上的抗原(或抗體)起反應(yīng),以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來(lái)確定酶標(biāo)記抗體的效價(jià),或稱工作濃度。
(二)步驟:先將抗原(或抗體)用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右,于聚苯乙烯板孔內(nèi)加0.1ml,4℃過(guò)夜,次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標(biāo)記抗體用1%BSA-PBS液依次稀釋成1:100,1:200,1:400,1:800,1:1600(根據(jù)據(jù)抗體的滴度而定),分別加入反應(yīng)孔中,每個(gè)稀釋度二孔,每孔0.1ml,37℃孵育1小時(shí)后洗滌。然后加底物液,每孔0.1ml,37℃10~30分鐘。以2M H2SO4 0.05ml終止反應(yīng)。
(三) 結(jié)果判定:主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值,并以O(shè)D為縱座標(biāo),結(jié)合物濃度為橫座標(biāo),繪制滴定曲線。由曲線上查得OD值為1.0左右,且曲線斜率zui大時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度,即為該標(biāo)記物的工作濃度。
注意事項(xiàng)
1. 在具備高質(zhì)量HRP的條件下,所要標(biāo)記的抗體也要活性高、效價(jià)高(zui低1:16)、純度高、親和力好,這是保證標(biāo)記物效價(jià)高,免疫活性好的首要條件。
2. 所使用試劑的PH和濃度及用量必須嚴(yán)格掌握。所用試劑,(或必需)新鮮配制。如在戊二醛標(biāo)記法中所用戊二醛應(yīng)為新鮮純品,因戊二醛儲(chǔ)存過(guò)久可形成縮和體(雜質(zhì))。否則,影響標(biāo)記效果。
3. 室溫?cái)嚢钑r(shí)須避光,室內(nèi)溫度一般在25℃為宜。標(biāo)記物每次透析前,須認(rèn)真檢查,防止漏液。
4. 濃的標(biāo)記物相當(dāng)穩(wěn)定,常加入30-40%甘油于-10℃下保存。4℃可保存1-2年,但稀釋成1:10,只能保存數(shù)周。已配制的使用液應(yīng)在12小時(shí)內(nèi)用完。切忌反復(fù)凍融。
酶標(biāo)記抗體 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品,勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司,產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū),我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向,不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品,提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒
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