晶抗生物流式細胞檢測樣本如何保存方法如下

2023年07月03日 09:11上海晶抗生物工程有限公司點擊量：3213

全血樣本：一般來說，血液樣本必須在6個小時內(nèi)處理，晚不得超過12小時；做完染色后，需要放在多聚甲醛中保存，一般可以存放3天左右。

培養(yǎng)細胞樣本：培養(yǎng)的細胞可以用多聚甲醛保存。做DNA倍體的樣本：將樣本保存在70%的乙醇中，并適量加入血清，-70℃冰箱保存，可以幾個月內(nèi)檢測。

抗體染色的流式細胞不能立即檢測該如何處理？

如果實驗對細胞活性要求比較高，如凋亡實驗，必須盡快檢測；如果實驗對細胞活性要求不高，可以使用含有4%多聚甲醛的PBS固定樣本30分鐘，固定后的細胞4℃過夜保存，次日檢測。

同型對照的作用是什么？

抗體有時會和非抗原結(jié)合，可能會因為非特異的蛋白-蛋白相互作用結(jié)合細胞內(nèi)成分，因為疏水作用結(jié)合脂肪，也可能會結(jié)合一些細胞表面表達的抗體受體。比如，IgG亞型的抗體會結(jié)合細胞表面的Fc受體，如CD16、CD32和CD64。理想條件下，各種類型的非特異性結(jié)合都可以通過蛋白（BSA、牛奶或動物血清）來阻斷。Fc受體的結(jié)合則可以通過與含免疫球蛋白的血清預(yù)孵育來阻斷。一個抗體非特異性相互作用和受體結(jié)合的情況，可以用無關(guān)抗原的相同亞型抗體來比照。

什么時候需要使用同型對照？

做胞內(nèi)流式實驗：比如流式細胞胞內(nèi)細胞因子、趨化因子和信號蛋白等。

表面標志特異性不高或者不常見的：一些特異性不高的抗體，如多抗，非特異性結(jié)合非常多，使用同型對照可排除假陽性；因為不熟悉不常見標志的表達情況，根據(jù)同型對照可以判斷陽性細胞的位置，對流式非常熟悉，且檢測的是CD3、CD4、CD19等表達強度非常高的標志，可以不使用同型對照。

怎樣選擇同型對照？

一般選擇與一抗的成分相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒光標記的抗體比如抗人的CD56 FITC標記的抗體，亞型是Mouse IgG1,κ，那么它的同型對照應(yīng)該是FITC標記的Mouse IgG1,κ，如果是抗體的組合形式，純化的一抗＋熒光標記的二抗，那么應(yīng)該選擇一抗的同型對照比如CD86的純化抗體，亞型是Mouse IgG1,κ，二抗是PE標記的抗小鼠IgG1，那么它的同型對照是純化的Mouse IgG1,κ。染色方式如下：樣本管，純化的CD86＋PE標記的抗Mouse IgG1(二抗)＋樣本；同型對照管，純化的同型對照＋PE標記的抗Mouse IgG1(二抗)＋樣本。

如果沒有找到適合的同型對照，在保持來源相同、熒光標記相同、免疫球蛋白類別相同條件下，優(yōu)先選擇的順序是亞鏈不同--亞型不同--相同類別比如，某抗體的來源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型對照表里找不到相同的同型對照，那么優(yōu)先選擇相同熒光標記Mouse IgG2а為同型對照；如果也沒有找到Mouse IgG2а，那么優(yōu)先選擇相同熒光標記的Mouse IgG2b作為同型對照；如果后還是沒有找到Mouse IgG2b，那么選擇相同熒光標記的Mouse IgG2作為同型對照。

為什么有時候同型對照的表達會比抗體的表達高？

首先需要檢查同型對照是否加錯類型、劑量等。其次，因為有些標志在細胞的表面或者胞內(nèi)表達不高，而跟其類似的抗原非常多，那么加入同型對照時，同型對照非特異性的結(jié)合會超過抗體的特異性，所以會造成這種現(xiàn)象。這個時候推薦使用其他陰性對照，如空白對照等。

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