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HE染色的方法步驟及注意事項(xiàng)

2023年05月26日 10:27上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司點(diǎn)擊量：1296

一、實(shí)驗(yàn)步驟：
（1）樣品制備：對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，yi酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS 洗滌3次。
（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。
（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來(lái)水洗滌。
（4）分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過(guò)深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來(lái)水洗滌。
（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來(lái)水洗滌。
（6）吹干或自然晾干細(xì)胞 爬片后，中性樹(shù)膠封片。
若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

二、注意事項(xiàng)：
1、染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng)，組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此，要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸li水溶液中處理10-30min，這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2、切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行，一般以細(xì)胞核染色清楚（晰）而細(xì)胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。如果過(guò)分延長(zhǎng)分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色。
3、切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹di，應(yīng)將切片退回wu水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹di脫水與透明。
4、在染色過(guò)程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。
5、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。
6、最后封固時(shí)，要用中性樹(shù)脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會(huì)褪色，所用樹(shù)脂濃度要適當(dāng)，樹(shù)脂封固時(shí)不能有氣泡。


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