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ELISA試驗(yàn)過(guò)程中各種樣本不同的處理辦法

2020年06月01日 10:42上海撫生實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：217

在搜集樣本前都必須有一個(gè)完好的方案，必須清楚要檢測(cè)的成份是否滿足穩(wěn)定。對(duì)搜集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩ｊP(guān)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，

好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)防止重復(fù)凍融。 液體類標(biāo)本: 包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培育上清等。

血清：室溫血液天然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉積，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管搜集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培育上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。

5. 培育細(xì)胞：檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)重復(fù)凍融或參加安排蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞損壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過(guò)程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。

6. 安排標(biāo)本：切開(kāi)標(biāo)本后，稱取分量。參加一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS（PH7.4），或安排蛋白萃取試劑，用手藝或勻漿器 將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其他冷凍備用。

7. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)防止重復(fù)凍融。

8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3按捺辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

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