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免疫熒光及免疫細胞化學(xué)

2011年04月27日 09:34研域(上海)化學(xué)試劑有限公司點擊量:889

免疫熒光及免疫細胞化學(xué)

什么叫免疫熒光細胞化學(xué)?是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位,以及利用定量技術(shù)測定含量。

用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。

免疫熒光細胞化學(xué)分直接法、夾心法、間接法和補體法。

什么叫免疫熒光細胞化學(xué)?免疫細胞化學(xué)(immunocytochemistry)是根據(jù)免疫學(xué)原理,利用抗體同特定抗原專一結(jié)合,對抗原進行定位測定的技術(shù)??乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結(jié)合的小分子;抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物,再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng),即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。

標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合方式主要有兩種:①直接法:用標(biāo)記抗體與抗體中的相應(yīng)抗原直接結(jié)合,操作方法簡便,特異性高,但敏感性較差,此法可用于檢定未知抗原;②間接法:先用未標(biāo)記的具有特異性的*抗體與樣品中的相應(yīng)抗原結(jié)合,然后再以標(biāo)記的第二抗體與特異性的*抗體結(jié)合;第二抗體是用*抗體作為抗原注入另一動物體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體,然后再結(jié)合以標(biāo)記物。通過這樣的放大作用,使抗原分子上的標(biāo)記物大大增多,故間接法較直接法的敏感性大為增高,約高5~10倍,故應(yīng)用更為廣泛。間接法中較常用的,如過氧化物酶-抗過氧化物酶復(fù)合物法(peroxidase anti-peroxidase complexmethod,  標(biāo)記方法PAP法),該法除需一抗和二抗外,還需要制備HRP標(biāo)記的抗酶抗體,即以HRP作為抗原免疫動物,制成抗HRP抗體,再以HRP對標(biāo)記該抗體,制成穩(wěn)定的環(huán)形PAP復(fù)合物。標(biāo)本先后經(jīng)一抗、二抗和PAP復(fù)合物處理后再以DAB顯色抗原存在部位可見棕黃色產(chǎn)物。

10年來,免疫細胞學(xué)技術(shù)有了很大進展,各種新方法相繼建立。單克隆抗體(monoclonal antibody)制備技術(shù)極大地提高抗體的特異性與免疫組化染色的性。繼PAP法之后由于*-親合素等試劑的應(yīng)用,為檢測微量抗原、受體、抗體提供了更的技術(shù)。

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