噬菌體抗體庫技術(shù)

2019年09月30日 09:19上海酶聯(lián)生物科技有限公司點(diǎn)擊量：1925

噬菌體抗體庫技術(shù)是近年發(fā)展起來的一項(xiàng)新的基因工程抗體技術(shù)。它是將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體，轉(zhuǎn)染工程細(xì)菌進(jìn)行表達(dá)，然后用抗原篩選即可獲得特異的單克隆噬菌體抗體。利用這一技術(shù)可以得到*人源性的抗體，在HIV等病毒感染和腫瘤的診斷與治療方面有其*的*性。

（一）基本原理和程序
噬菌體抗體庫技術(shù)的原理，簡言之就是用PCR技術(shù)從人免疫細(xì)胞中擴(kuò)增出整套的抗體重鏈可變區(qū)（VH）和輕鏈可變區(qū)（VL）基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達(dá)在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗體基因的存在，同時(shí)在其表面又有抗體分子的表達(dá)，就可以方便地利用抗原—抗體特異性結(jié)合而篩選出所需要的抗體，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。使抗體基因以分泌的方式表達(dá)，則可獲得可溶性的抗體片段。在建庫過程中如果將VH和VI。隨機(jī)組合，則可建成組合抗體文庫；如果抗體mRNA來源于未經(jīng)免疫的正常人，則可以在不需要細(xì)胞融合的情況下建立起人天然抗體庫。

構(gòu)建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個(gè)過程：①從外周血或脾、淋巴結(jié)等組織中分離B淋巴細(xì)胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；②應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增不同的Ig基因片段；③構(gòu)建噬菌體載體。噬菌體抗體庫載體有入噬菌體、絲狀噬菌體和噬菌粒三種，其中后二者是目前構(gòu)建表面表達(dá)的噬菌體抗體庫（surfacedisplayantibody library）常用載體；④表達(dá)載體轉(zhuǎn)化細(xì)菌，構(gòu)建全套抗體庫。通過多輪的抗原親和吸附—洗脫—擴(kuò)增，zui終篩選出抗原特異的抗體克隆。

（二）噬菌體抗體庫技術(shù)的特點(diǎn)

1．避免使用人工免疫和雜交瘤技術(shù) 由于抗體庫的大容量和*的篩選效率，使得可以調(diào)出任意抗體基因，用基因工程方法制備抗體，從而避免了使用人工免疫動(dòng)物和細(xì)胞融合技術(shù)。

2．模擬天然全套抗體庫抗體文庫可以達(dá)到或超過1011庫容，所以能包含B細(xì)胞全部克隆。建庫的外源基因來自人體外周血，骨髓或脾臟的淋巴細(xì)胞提取的mmDNA，mmDNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA，這些mRNA是人體多克隆細(xì)胞的總mRNA。使用的通用引物采自多個(gè)人體，具有人的種屬普遍性?？贵w的VH和VL基因的隨機(jī)重組也增加了抗體的多樣性。

3．可獲得高親和力的人源化抗體在中，VH和VL基因的隨機(jī)重組模擬了體內(nèi)抗體親和力成熟的過程，所用的抗體基因又來自人體，因此，所產(chǎn)生的抗體必然都是高親和力的人源化抗體。

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