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冷凍細(xì)胞該如何解凍

2017年03月31日 16:42上海邦景實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：343

細(xì)胞株冷凍細(xì)胞解凍程序:
1.依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。
2.FBS(fetalbovineserum,胚牛血清),CS(calfserum,小牛血清)和HS(horseserum,馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異極大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。
3.將潔特培養(yǎng)基置于37C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。取出潔特冷凍管，立即放入37C水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖潔特冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。
4.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)取10ml培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25或T75JET培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10ml潔特培養(yǎng)基中，離心300xg(約1000rpm)，5分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮的潔特培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至潔特培養(yǎng)瓶中，再放入37°C，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
細(xì)胞株原代骨細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100
原代滑膜皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100
原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100ml
原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100ml
原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代軟骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100ml
原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代上皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100ml
原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基    包裝：    500/250/100ml
原代神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑    包裝：    5/2.5/1ml
細(xì)胞株

 

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