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技術文章

猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒說明書

閱讀:303發(fā)布時間:2014-9-30

猴白介素4(IL-4)操作步驟:
1. 加入50ul標準品(Standards)、血清標本于相應反應板孔中。 
2. 每孔加入100ul酶聯(lián)物(Conjugate),輕輕混勻30秒(重要),室溫60分鐘。 
3. 洗板:甩盡板內(nèi)液體,用蒸餾水或者洗滌液(普通洗滌液,自配)洗滌反應板,并去除 
水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復洗滌5次。 
4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫20分鐘。 
5. 每孔加入50ul終止液(Stop Solution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD 
值。elisa試劑盒

猴白介素4(IL-4)樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. , 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒注意事項:
1.   試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.   濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.   各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.   請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.   封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.   底物請避光保存。
7.   嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.   所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.   本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。


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