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單相瓊脂擴散試驗小鼠ELISA試劑盒原理、方法與結果

閱讀：316發(fā)布時間：2013-9-11

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多姿多彩的瓊脂原理

一種定量試驗，將一定量的抗體混合于瓊脂內(nèi)，傾注于玻片上，凝固后，在瓊脂層上打孔，再將抗原 加入孔中，使其向四周擴散?？乖贵w復合物形成的沉淀環(huán)直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標準抗原制成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從標準曲線中求出。本試驗主要用于檢查標本中各種免疫球蛋白和血清IgG含量。

材料

1.抗體：羊抗人IgG單價抗血清。

2.抗原 ：待檢血清。

3.3%生理鹽水瓊脂 、生理鹽水、載玻片、直徑3mm打孔器、小三角燒瓶、毛細滴管、濕盒。

小鼠ELISA試劑盒方法

1、制備含抗體的瓊脂 板

取羊抗人IgG單價抗血清一瓶（效價1：80），量取0.3ml于一小三角燒瓶中，加生理鹽水11.7ml（40倍稀釋混勻，置56℃水浴中恒溫2~3分鐘）。

取3%生理鹽水瓊脂 一管，隔水加熱使溶，然后置56℃水浴中，待瓊脂溫度降至56℃時，立即加入等量1：40稀釋抗血清，迅速輕輕混勻，勿使產(chǎn)生氣泡，迅速傾入載玻片上，每片3.5ml，待凝固后打孔。如下圖所示。
2、稀釋待檢血清

將待檢血清用生理鹽水作40倍稀釋，

3、打孔、加樣

每份檢樣加兩孔，加滿（但不要溢出），加樣時毛細滴管不要劃破瓊脂。

4、溫育

小鼠ELISA試劑盒將瓊脂板置搪瓷盒，墊濕紗布或海綿以防干燥，37℃恒溫箱24h。

結果觀察與分析

測量并求出每份檢樣兩孔的沉淀環(huán)平均直徑，按照標準曲線求出IgG含量。
 

 

 


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