我們干的研究工作大部分是基因治療，抽提質(zhì)粒是一件相當(dāng)痛苦的事。因?yàn)樾枰鰟游锏捏w內(nèi)實(shí)驗(yàn)，您需要靜脈注射50微克
質(zhì)粒抽提試劑盒的動物，三次重復(fù)注射，每次150毫克，如果有60只需要9。如果需要大量抽提質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)人員就清楚這是需要多大的工作量并且需要提出的是靜脈注射動物用的質(zhì)粒是需要去內(nèi)毒素的，目前去內(nèi)毒素得率zui高的非哈靈生物莫屬。
要有高產(chǎn)率高質(zhì)量的質(zhì)粒抽提試劑盒，以下幾個關(guān)鍵點(diǎn)要注意：
1. 準(zhǔn)備必要的設(shè)備，根據(jù)協(xié)議，連接到的廣口瓶，直徑45毫米，這是因?yàn)楸仨毰c瓶可以匹配，操作的真空過濾這一步可以迅速和容易，減少不必要的麻煩。
2. 高拷貝質(zhì)粒是的，主管細(xì)菌是的高拷貝。作為*，DH5α稍差。主管細(xì)菌是剛做不久。
3. 每次在600毫升細(xì)菌數(shù)量，LB注意水質(zhì)量一定要好，一定的pH值在7.27.4，搖床轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分，16小時，注意其濃度必須堅(jiān)強(qiáng)。
4. 操作過程必須與時間的指示一致，嚴(yán)格操作。要注意一點(diǎn)：添加中和在的時間較短，因此需要真空，快速進(jìn)入下一步。
5.洗脫時間很長，要有耐心，不要讓臟兮兮的洗脫液停止。
6.異丙醇沉淀DNA離心在20000轉(zhuǎn)離心45分鐘，可以提高20%的產(chǎn)量。
7.是圓底離心管和透明，以免離心破裂，而且操作方便。
8.在一定要提前質(zhì)粒沉淀在棄異丙醇和乙醇一般位置，不誘導(dǎo)質(zhì)粒被遺棄了。
9.溶解DNA注意溶液的體積比在手冊的說明略小，*二次溶解，然后混合。
相信注意這些細(xì)節(jié)后，你將獲得每一次以上1.5mg質(zhì)粒。
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