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公司動(dòng)態(tài)

微生物所在病毒沉默抑制子研究方面獲得進(jìn)展

閱讀：243發(fā)布時(shí)間：2013-4-7

　　在植物和病毒相互作用的長(zhǎng)期過(guò)程中，兩者之間存在著防御、反防御的復(fù)雜斗爭(zhēng)關(guān)系。寄主的RNA沉默機(jī)制和病毒編碼沉默抑制子就是防御-反防御斗爭(zhēng)的典型。由黃瓜花葉病毒（CMV）編碼的基因沉默抑制子2b蛋白是早在1998年就被發(fā)現(xiàn)的抑制子之一，CMV2b盡管是一個(gè)只有111個(gè)氨基酸的小蛋白，卻具有非常復(fù)雜的生化特性和亞細(xì)胞定位特性，包括與RNA沉默途徑效應(yīng)復(fù)合物的關(guān)鍵因子AGO蛋白互作，與短/長(zhǎng)的dsRNA結(jié)合，靶向細(xì)胞核和核仁；CMV2b還具有復(fù)雜的抑制子活性，包括抑制轉(zhuǎn)錄后基因沉默（PTGS）和依賴RNA的DNA甲基化（RdDM），抑制沉默的細(xì)胞間傳遞，抑制AGO蛋白的剪切活性，抑制寄主的RDR6-依賴的抗病毒途徑等。但是關(guān)于2b的這111個(gè)氨基酸究竟是如何決定的2b的這些生化特性，又是如何影響2b復(fù)雜的抑制子活性，其機(jī)制目前還研究得很不透徹。
　　
　　在國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目，國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）等項(xiàng)目資助下，*微生物研究所植物基因組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭惠珊課題組，通過(guò)分段克隆構(gòu)建了CMV2b蛋白的11個(gè)突變體，詳細(xì)分析了2b各種突變體的亞細(xì)胞定位、RNA結(jié)合特性、與AGO間的互作、對(duì)PTGS和RdDM途徑的抑制作用等。
　　
　　研究發(fā)現(xiàn)，2b的dsRNA的結(jié)合活性以及2b的核定位所需要的結(jié)構(gòu)域與2b與AGO蛋白的互作所需要的結(jié)構(gòu)域是分開的。他們鑒定出2b的核仁定位信號(hào)（NoLS）位于2b結(jié)合dsRNA的結(jié)構(gòu)域（dsRBD）之間；2b和AGO蛋白的體外互作不需要dsRBD。有趣的是，SD2b與AGO蛋白在體內(nèi)的互作需要這個(gè)有功能的NoLS，并且2b和AGO的體內(nèi)互作改變2b和AGO的細(xì)胞核定位。通過(guò)體內(nèi)抑制子活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，2b蛋白通過(guò)捕獲siRNAs、長(zhǎng)的dsRNAs前體dsRNA，而不是通過(guò)作用于AGO蛋白，來(lái)實(shí)現(xiàn)其抑制子活性。也就是說(shuō)，體內(nèi)抑制PTGS和RdDM都不依賴于2b-AGO的相互作用。

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