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大鼠ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)條件和方法

閱讀：457發(fā)布時(shí)間：2015-8-26

    大鼠ELISA試劑盒測(cè)定現(xiàn)通常為采用手工操縱的以微孔板條為固相的測(cè)定模式，測(cè)定操縱非常簡(jiǎn) 樸，一般涉及到標(biāo)本的收集保留、試劑預(yù)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判定和結(jié)果講演及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié) 果，大鼠ELISA試劑盒且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。濺出會(huì)對(duì)臨近孔產(chǎn)生污染。 

1. 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。大鼠ELISA試劑盒不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
2.包被抗體或抗原的選擇：將抗體或抗原吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。ELIAS試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
3. 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接大鼠ELISA試劑盒法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法"，在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。


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