人25羥基*3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人25羥基*3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

69029 PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit  人磷脂酰*  48T
69030 PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit  人*磷酸甘油酯  48T
69031 TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit  人總膽汁酸  48T
69032 Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit  人載脂蛋白C3  48T
69033 CH(Human cholesterol) ELISA Kit  人血清總*  48T
69034 MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit  人金屬硫蛋白2  48T
69035 sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit  人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1  48T
69036 3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit  人3-硝基*  48T
69037 GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit  人糖胺聚糖  48T
69038 CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit  人半胱氨酰白三烯  48T
69039 CALU(Human calumenin) ELISA Kit  人鈣腔蛋白  48T
69040 apo-A5(Human apoprotein A5) ELISA Kit  人載脂蛋白A5  48T
69041 DBP(Human Vitamin D-binding protein) ELISA Kit  人*結(jié)合蛋白  48T
69042 SEP1(Human selenoprotein 1) ELISA Kit  人硒蛋白1  48T
69043 SAA3(Human serum amyloid A3) ELISA Kit  人血清淀粉樣蛋白A3  48T
69044 Gbp4(Human guanylate nucleotide binding protein 4) ELISA Kit  人鳥苷酸結(jié)合蛋白4  48T
69045 cytb561(Human lipocalin 2) ELISA Kit  人細(xì)胞色素b561  48T
69046 LCN2(Human lipocalin 2) ELISA Kit  人脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2  48T
69047 aFABP(Human adipocyte fatty acid-binding protein) ELISA Kit  人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白  48T
69048 GPC-3(Human Glypican-3) ELISA Kit  人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3  48T
69049 GLUT3(Human Glucose transporter 3) ELISA Kit  人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3  48T
69050 RBP(Human Retinol binding protein) ELISA Kit  人*結(jié)合蛋白  48T
69051 8-OHdG(Human hydroxylysine) ELISA Kit  人8羥基脫氧鳥苷  48T
69052 Hyl(Human hydroxylysine) ELISA Kit  人羥賴氨酸  48T
69053 GAP(Human GTPase activating protein) ELISA Kit  人GTP酶活化蛋白  48T
69054 Apo-H(Human Apolipoprotein H) ELISA Kit  人載脂蛋白H  48T
69055 GPI(Human glycophosphatidylinositol) ELISA Kit  人糖磷脂酰肌醇  48T
69056 PWM(Human pokeweed mitogen) ELISA Kit  人美洲商陸素  48T
69057 LPS(Human Lipopolysaccharides) ELISA Kit  人脂多糖/內(nèi)毒素  48T
69058 Human preptin ELISA Kit  人preptin  48T
69059 PPAR- Alpha(Human peroxisome proliferators activator receptors alpha) ELISA Kit  人過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α  48T
69060 Apo-E(Human Apolipoprotein E) ELISA Kit  人載脂蛋白E  48T
69061 OGP(Human Osteogenic Growth Peptide) ELISA Kit  人成骨生長(zhǎng)肽  48T
69062 ODF(Human osteoclast differentiation factor) ELISA Kit  人破骨細(xì)胞分化因子  48T
69063 OH-PYD(Human Hydroxy-Pyridinium crosslinks) ELISA Kit  人羥基膠原吡啶交聯(lián)  48T
69064 DPD(Human Deoxypyridinoline crosslinks) ELISA Kit  人脫氧膠原吡啶交聯(lián)  48T
69065 PYD(Human Pyridinoline crosslinks) ELISA Kit  人膠原吡啶交聯(lián)  48T
69066 SPA(Human Staphylococal protein A) ELISA Kit  人葡萄球菌蛋白A  48T
69067 ConA(Human concanavalin A) ELISA Kit  人刀豆素A  48T
69068 FEP(Human Free erythrocyte proloporphyrin) ELISA Kit  人游離原卟啉  48T
69069 LBP(Human lipolysaccharide binding protein) ELISA Kit  人脂多糖結(jié)合蛋白  48T
69070 GSH-Px(Human Glutathione peroxidase) ELISA Kit  人*過(guò)氧化酶  48T
69071 GSH(Human glutathione) ELISA Kit  人*  48T
69072 17-KS(Human 17-ketosteroids) ELISA Kit  人17-酮類固醇  48T
69073 17-OHCS(Human 17-Hydroxycorticosteroids) ELISA Kit  人17羥皮質(zhì)類固醇  48T
69074 cath-K(Human Cathepsin K) ELISA Kit  人組織蛋白酶K  48T
69075 BMPs(Human bone morphogenetic proteins) ELISA Kit  人骨形成蛋白  48T
69076 RBP-4(Human Retinol binding protein 4) ELISA Kit  人*結(jié)合蛋白4  48T
69077 PLP(Human proteolipid protein) ELISA Kit  人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體  48T
69078 VMA(Human vanillylmandelic acid) ELISA Kit  人垂草扁桃酸  48T
69079 GKRP(Human glucokinase regulatory protein) ELISA Kit  人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白  48T
69080 HA(Human hemagglutinin) ELISA Kit  人25羥基*3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒人血凝素  48T
69081 ADRP(Human adipose differentiation-related protein) ELISA Kit  人脂肪分化相關(guān)蛋白  48T
69082 CALD(Human Caldesmon) ELISA Kit  人鈣調(diào)結(jié)合蛋白  48T
69083 CaN(Human calcineurin) ELISA Kit  人鈣調(diào)磷酸酶  48T

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人25羥基*3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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