人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

67738 SYK (Spleen tyrosine kinase)  非受體型*激酶(抗原)  0.5mg
67739 Tau protein  微管相關(guān)蛋白（抗原）  0.5mg
67740 TGF- BetaR1/ALK-5(TGF-beta receptor type I)  轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1（抗原）  0.5mg
67741 Thy-1/CD90  CD90(抗原)  0.5mg
67742 Thioster-containing protein 1  硫酯包含蛋白-1(抗原)  0.5mg
67743 TIGAR humen (TP53- induced glycolysis and apoptosis-regulator )  P53誘導(dǎo)糖酵解和凋亡調(diào)節(jié)因子蛋白（抗原）  0.5mg
67744 TIMP-4(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-4)  金屬蛋白酶組織抑制因子-4(抗原)  0.5mg
67745 TPO(Thyroid Peroxidase)  甲狀腺過(guò)氧化物酶(抗原)  0.5mg
67746 TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)  促甲狀腺素受體（抗原）  0.5mg
67747 TSLP(Thymic stromal lymphopoietin isoform 1)  淋巴細(xì)胞生成素-1（抗原）  0.5mg
67748 TTF-2(thyroid transcription factor 2;forkhead box E1)  甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2(抗原)  0.5ml
67749 Tyrosinase  *酶(多肽抗原)  0.5mg
67750 OAT4L又稱URAT1 (Urate Transporter 1)  尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1 (抗原)  0.5mg
67751 VAP1(vascular adhesion protein 1)  血管粘附蛋白1（多肽抗原）  0.5mg
67752 Vimentin  波形蛋白（抗原）  0.5mg
67753 VSIG4 (V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4)  VSIG4 T淋巴細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一（抗原）  0.5mg
67754 WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4)  一種新的*/*激酶家族成員的基因WNK4（多肽抗原）  0.5mg
67755 ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle  鋅指蛋白300(抗原)  0.5ml
67756 ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a)  鋅指脂蛋白-1a(抗原)  0.5mg
67757 ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1b)  鋅指脂蛋白-1b(抗原）  0.5mg
67758 ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1c)  人鋅指脂蛋白-1c(抗原)  0.5mg
67759 IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat  干擾素-γ多肽抗原（大、小鼠）  0.5mg
67760 IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-Human  干擾素-γ多肽抗原（人）  0.5mg
67761 IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat  干擾素-β抗原  0.5mg
67762 IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-human  干擾素-β抗原  0.5mg
67763 PSCA (Prostate Stem Cell Anti-gen)  前列腺干細(xì)胞抗原  0.5mg
67764 sIgA  大鼠分泌型IgA(抗原)  1mg
67765 化合物與牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)抗原      化合物與雞卵蛋白OVA偶聯(lián)抗原  與血藍(lán)蛋白KLH偶聯(lián)抗原
67766 Melamine/KLH  三聚氰胺與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物  5mg
67767 Melamine/BSA  三聚氰胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物  2mg
67768 Melamine/OVA(ovalbumin)  三聚氰胺與雞卵白蛋白偶聯(lián)物  10mg
67769 chloramphenicol/BSA  *偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
67770 chloramphenicol/OVA  *偶聯(lián)雞卵白蛋白蛋白  2mg
67771 Gentamicin/BSA  *偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
67772 Gentamicin/OVA  *偶聯(lián)雞卵白蛋白  2mg
67773 Tetracycline/BSA  四環(huán)素偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
67774 Gentamicin/FITC  熒光素標(biāo)記*  1ml
67775 Tetracycline/OVA  四環(huán)素偶聯(lián)雞卵白蛋白  2mg
67776 Oxytetracycline/BSA  *偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
67777 Oxytetracycline/OVA  *偶聯(lián)雞卵白蛋白  2mg
67778 streptomycin/OVA  *偶聯(lián)血藍(lán)蛋白  5mg
67779 Penicillin G/BSA  *G偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
67780 Penicillin G/OVA  *G偶聯(lián)雞卵白蛋白  2mg
67781 streptomycin/BSA  *偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
67782 streptomycin/OVA  *偶聯(lián)雞卵白蛋白  10mg
67783 Metronidazole/OVA  *偶聯(lián)雞卵白蛋白  10mg
67784 Metronidazole/BSA  *偶聯(lián)牛血清白蛋白  10mg
67785 Morphine/KLH  *與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物  5mg
67786 Metronidazole/KLH  *偶聯(lián)牛血藍(lán)蛋白  10mg
67787 Morphine/BSA  *與牛血清蛋白偶聯(lián)物  10mg
67788 TRF(transferrin) 人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒 轉(zhuǎn)鐵蛋白  10mg
67789 Melamine/OVA  三聚氰胺偶聯(lián)雞卵白蛋白  1mg
67790 Melamine/BSA  三聚氰胺偶聯(lián)牛血清白蛋白  1mg
67791 GABA/KLH   γ1氨基丁酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白  1mg
67792 GABA/BSA   γ1氨基丁酸偶聯(lián)牛血清白蛋白  1mg

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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